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爱如风过3610

金虫 (正式写手)

[求助] 质粒提取不出来,求解决办法 已有7人参与

50ml培养基加2ml菌液摇菌,摇多长时间提质粒比较好啊,过夜12小时太长吗?时间太长会质粒丢失吗?
具体实验步骤,我是要把之前得到的96孔板里的菌混合起来摇菌测序,由于比较多,每一个孔取5微升,然后全部取出来后,加2ml混合菌到50ml培养基中过夜摇,第二天菌生长正常,但是提不出质粒,不知哪里有问题,是因为摇的时间太长吗?
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加油加油!!!
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梅太奇阿拉干

木虫 (小有名气)

你加抗生素了吗?可能是杂菌污染

发自小木虫Android客户端
2楼2016-07-15 21:38:30
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bright8

铁杆木虫 (著名写手)

3楼2016-07-15 23:07:17
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-16 22:08:00
我一般都是50ml离心管加15ml培养基,菌液先活化2小时再接种1:100的比例接,然后培养14个小时吧,第二天用试剂盒提质粒,一般都能提出来,你的提不出来是不是传代次数太多,时间久了质粒丢失,之前有没有保存好的质粒,重新转化一次试试?
想做个有趣的人,却在逗比的道路上越走越远~
4楼2016-07-16 10:19:05
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不会悲伤的鱼

新虫 (初入文坛)

质粒怎么都能提出来的吧,只是是不是你的目的质粒而已,但是每个人操作方法也不同,我觉得你可以一步一步排除原因,首先是你的菌液,先鉴定一下,pcr什么的,确保菌是正确的,然后是摇菌,我们一般认为大肠的生长期为12—16h,所以12小时不算长,也可以参考od值,第三就是用试剂盒的操作步骤和方法了

发自小木虫IOS客户端
5楼2016-07-16 10:32:41
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y383514131

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-16 22:08:09
一般质粒上都会有特定的抗性基因,如果加入相应抗性基因,含有相应质粒的菌就会成为优势菌,所以可以考虑加千分之一的相应抗性
此事说来终觉浅,莫问出处便是真
6楼2016-07-16 21:53:20
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
提质粒的话我们都是摇将近12个小时的,这应该不是提不出来的原因~如果培养时加抗生素了,保证长出来的菌是转化子,提不出来可能是由于质粒的拷贝数太低~之前我们做谷棒就是这样,一直提不出来,后来才知道是拷贝数只有不到5,根本就提不出来
···
7楼2016-07-17 14:31:25
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祝福
8楼2016-07-17 15:38:09
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祝福
9楼2016-07-17 17:05:36
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祝福
10楼2016-07-17 17:54:05
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