24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 6195  |  回复: 24

爱如风过3610

金虫 (正式写手)

[求助] 质粒提取不出来,求解决办法 已有7人参与

50ml培养基加2ml菌液摇菌,摇多长时间提质粒比较好啊,过夜12小时太长吗?时间太长会质粒丢失吗?
具体实验步骤,我是要把之前得到的96孔板里的菌混合起来摇菌测序,由于比较多,每一个孔取5微升,然后全部取出来后,加2ml混合菌到50ml培养基中过夜摇,第二天菌生长正常,但是提不出质粒,不知哪里有问题,是因为摇的时间太长吗?
回复此楼
加油加油!!!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梅太奇阿拉干

木虫 (小有名气)

你加抗生素了吗?可能是杂菌污染

发自小木虫Android客户端
2楼2016-07-15 21:38:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bright8

铁杆木虫 (著名写手)

3楼2016-07-15 23:07:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-16 22:08:00
我一般都是50ml离心管加15ml培养基,菌液先活化2小时再接种1:100的比例接,然后培养14个小时吧,第二天用试剂盒提质粒,一般都能提出来,你的提不出来是不是传代次数太多,时间久了质粒丢失,之前有没有保存好的质粒,重新转化一次试试?
想做个有趣的人,却在逗比的道路上越走越远~
4楼2016-07-16 10:19:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不会悲伤的鱼

新虫 (初入文坛)

质粒怎么都能提出来的吧,只是是不是你的目的质粒而已,但是每个人操作方法也不同,我觉得你可以一步一步排除原因,首先是你的菌液,先鉴定一下,pcr什么的,确保菌是正确的,然后是摇菌,我们一般认为大肠的生长期为12—16h,所以12小时不算长,也可以参考od值,第三就是用试剂盒的操作步骤和方法了

发自小木虫IOS客户端
5楼2016-07-16 10:32:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

y383514131

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-16 22:08:09
一般质粒上都会有特定的抗性基因,如果加入相应抗性基因,含有相应质粒的菌就会成为优势菌,所以可以考虑加千分之一的相应抗性
此事说来终觉浅,莫问出处便是真
6楼2016-07-16 21:53:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
提质粒的话我们都是摇将近12个小时的,这应该不是提不出来的原因~如果培养时加抗生素了,保证长出来的菌是转化子,提不出来可能是由于质粒的拷贝数太低~之前我们做谷棒就是这样,一直提不出来,后来才知道是拷贝数只有不到5,根本就提不出来
···
7楼2016-07-17 14:31:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
祝福
8楼2016-07-17 15:38:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
祝福
9楼2016-07-17 17:05:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
祝福
10楼2016-07-17 17:54:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 爱如风过3610 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿0817化学工程与技术,求调剂 +11 我不是只因 2026-04-02 12/600 2026-04-03 11:39 by 帕尔马拉特
[考研] 280求调剂 +15 咕噜晓晓 2026-04-02 16/800 2026-04-03 09:28 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +7 祉岷. 2026-04-02 7/350 2026-04-03 09:11 by 花呗还欠600
[考研] 085600,320分求调剂 +6 大馋小子 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:54 by dongzh2009
[考研] 085602化工求调剂(331分) +9 111@127 2026-03-30 9/450 2026-04-02 20:00 by dick_runner
[考研] 材料工程322分 +8 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-01 8/400 2026-04-02 11:53 by 3041
[考研] 0710生物学,325求调剂 +3 mkkkkkl 2026-04-01 3/150 2026-04-02 09:48 by Jaylen.
[考研] 085410 一志愿211 22408分数359求调剂 +3 123456789qw 2026-03-31 4/200 2026-04-02 00:06 by 义文wang
[考研] 材料调剂 +14 一样YWY 2026-04-01 14/700 2026-04-01 21:07 by lijunpoly
[考研] 265求调剂 +11 yelck 2026-04-01 12/600 2026-04-01 19:12 by 549790059
[考研] 调剂 +5 好好读书。 2026-03-28 7/350 2026-04-01 15:32 by 王亮_大连医科大
[考研] 省双一流重点一本大学招收调剂 +4 wwwwffffff 2026-03-31 7/350 2026-04-01 15:23 by wwwwffffff
[硕博家园] 考研调剂 +5 骆驼男人 2026-04-01 5/250 2026-04-01 14:28 by syjjj0321
[考研] 考研材料工程351分调剂 +5 整个好的 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:36 by topgun2009
[考研] 335求调剂 +3 321* 2026-03-31 4/200 2026-04-01 00:00 by 321*
[考研] 08工科,295,接受跨专业调剂 +6 lmnlzy 2026-03-30 6/300 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 083000环境科学与工程调剂,总分281 +4 橙子(胜意) 2026-03-30 4/200 2026-03-31 00:44 by Linzejun
[考研] 哈尔滨工业大学材料与化工专硕378求调剂 +3 塔比乌斯 2026-03-30 3/150 2026-03-30 22:55 by 无际的草原
[考研] 283求调剂 +3 A child 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:41 by ms629
[考研] 295求调剂 +5 1428151015 2026-03-27 6/300 2026-03-28 04:04 by fmesaito
信息提示
请填处理意见