应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 农杆菌转化后菌落PCR就是不出目的条带，求助。
51/1返回列表
查看: 9325  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

damaoouba

木虫 (正式写手)

[求助] 农杆菌转化后菌落PCR就是不出目的条带，求助。 已有3人参与

事情是这样的。

目的片段连载体，提取质粒后质粒送测序，没有问题。
然后质粒转农杆菌，4天长出菌落。
挑菌划线后进行菌落PCR，但是就是没有目的条带。。。
咋回事呢？？？？可能是哪一步出了问题？？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-07-06 14:35:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般经验是：
1、农杆菌转化后会长出很多菌落
2、放置在28℃环境2天即可长出
3、电击转化时是否出现炸杯现象
     这样可能导致没有转入成功
4、0.5ul质粒加入50ul感受态转化
5、若保证每个环节没问题，
     那么挑菌提质粒再做PCR，
     因为有的菌拷贝数很低
赞一下 回复此楼
8楼2016-07-07 09:15:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 鼓励发帖交流 2016-07-07 08:30:51
四天才长出菌落？假阳性吧。长的菌落提质粒了吗？农杆菌的感受态确定没有问题吗？确定没有问题的话，建议重新转化。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2016-07-06 14:40:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
菌落PCR的时候最好把菌放在无菌水里煮一下，离心，取上清做模板
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2016-07-06 16:04:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这太笼统了，把你实验的过程和实验的对照都写出来呀。
赞一下 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2016-07-06 16:44:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭