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damaoouba

木虫 (正式写手)

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[求助] 农杆菌转化后菌落PCR就是不出目的条带，求助。已有3人参与

事情是这样的。

目的片段连载体，提取质粒后质粒送测序，没有问题。
然后质粒转农杆菌，4天长出菌落。
挑菌划线后进行菌落PCR，但是就是没有目的条带。。。
咋回事呢？？？？可能是哪一步出了问题？？

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1楼 2016-07-06 14:35:28

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damaoouba

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引用回帖:

4楼: Originally posted by 781055707 at 2016-07-06 16:44:46
你这太笼统了，把你实验的过程和实验的对照都写出来呀。

双酶切后目的片段连载体3301.
转化大肠杆菌，提取质粒，质粒测序有目的片段。
质粒浓度不高，400+吧，转农杆菌，50ul农杆菌加了5ul质粒。
常规方法转了农杆菌，画板，kana抗性加利福平。
4天长出菌斑，就长了4个。
然后划线长得也比较慢，菌落PCR,直接挑菌做的。。
没有放对照。。
我应该在PCR的时候放什么对照呢？？
分子还是比较弱的。。。还请多指点

谢谢啦。