24小时热门版块排行榜    

查看: 3713  |  回复: 22
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

洛一7轮

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助,为什么我的DNA电泳一直失败 已有3人参与

是DNA降解了,还是退火温度过低,还是胶的问题。第二天跑,有条带了,但不是我想要的条带。
dna是水煮法提的,pcr是2*Taq,模板,上下引和dd水。变性95度5分钟,退火58度,延伸72度。电泳胶1.5%琼脂糖,dna大小200到500bp,电压90v。
不知道问题出在哪,求大神帮助我这个初入生物分子的人

求助,为什么我的DNA电泳一直失败


求助,为什么我的DNA电泳一直失败-1


@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan 发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baiyu_560

金虫 (著名写手)

有引物二聚体,说明PCR体系没问题。偶尔能扩出条带,说明DNA模板没提好!水煮法新手难提好!建议用CTAB或SDS常规办法精提DNA试试!可通过电泳检测DNA质量。

发自小木虫Android客户端
试一试又何妨?
5楼2016-07-05 16:09:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

Forest666

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-07 07:35:10
一般PCR完之后放过夜应该是没事的,我一般是在程序的最后设一个20℃,时间无限长,第二天去收结果。看你跑胶的图,DNA没有降解的现象。估计是没扩增出来,不知道你的Marker是多大,我觉得图上的条带有可能是引物。确认你的模板没问题,然后改一下退火温度。
ATGC
2楼2016-07-05 15:10:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

洛一7轮

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Forest666 at 2016-07-05 15:10:25
一般PCR完之后放过夜应该是没事的,我一般是在程序的最后设一个20℃,时间无限长,第二天去收结果。看你跑胶的图,DNA没有降解的现象。估计是没扩增出来,不知道你的Marker是多大,我觉得图上的条带有可能是引物。确 ...

marker1004

发自小木虫Android客户端
3楼2016-07-05 15:50:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

洛一7轮

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Forest666 at 2016-07-05 15:10:25
一般PCR完之后放过夜应该是没事的,我一般是在程序的最后设一个20℃,时间无限长,第二天去收结果。看你跑胶的图,DNA没有降解的现象。估计是没扩增出来,不知道你的Marker是多大,我觉得图上的条带有可能是引物。确 ...

退火是要升还是降,模板应该没问题,有条带跑出来了

发自小木虫Android客户端
4楼2016-07-05 15:52:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 72/3600 2026-08-16 13:15 by 医学老男孩
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
请填处理意见