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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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洛一7轮

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助,为什么我的DNA电泳一直失败 已有3人参与

是DNA降解了,还是退火温度过低,还是胶的问题。第二天跑,有条带了,但不是我想要的条带。
dna是水煮法提的,pcr是2*Taq,模板,上下引和dd水。变性95度5分钟,退火58度,延伸72度。电泳胶1.5%琼脂糖,dna大小200到500bp,电压90v。
不知道问题出在哪,求大神帮助我这个初入生物分子的人

求助,为什么我的DNA电泳一直失败


求助,为什么我的DNA电泳一直失败-1


@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan 发自小木虫Android客户端
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洛一7轮

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Forest666 at 2016-07-05 15:10:25
一般PCR完之后放过夜应该是没事的,我一般是在程序的最后设一个20℃,时间无限长,第二天去收结果。看你跑胶的图,DNA没有降解的现象。估计是没扩增出来,不知道你的Marker是多大,我觉得图上的条带有可能是引物。确 ...

marker1004

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3楼2016-07-05 15:50:33
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Forest666

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-07 07:35:10
一般PCR完之后放过夜应该是没事的,我一般是在程序的最后设一个20℃,时间无限长,第二天去收结果。看你跑胶的图,DNA没有降解的现象。估计是没扩增出来,不知道你的Marker是多大,我觉得图上的条带有可能是引物。确认你的模板没问题,然后改一下退火温度。
ATGC
2楼2016-07-05 15:10:25
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洛一7轮

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Forest666 at 2016-07-05 15:10:25
一般PCR完之后放过夜应该是没事的,我一般是在程序的最后设一个20℃,时间无限长,第二天去收结果。看你跑胶的图,DNA没有降解的现象。估计是没扩增出来,不知道你的Marker是多大,我觉得图上的条带有可能是引物。确 ...

退火是要升还是降,模板应该没问题,有条带跑出来了

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4楼2016-07-05 15:52:31
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baiyu_560

金虫 (著名写手)

有引物二聚体,说明PCR体系没问题。偶尔能扩出条带,说明DNA模板没提好!水煮法新手难提好!建议用CTAB或SDS常规办法精提DNA试试!可通过电泳检测DNA质量。

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试一试又何妨?
5楼2016-07-05 16:09:24
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