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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

[交流] Xho I的黏端比较难连接?

为什么Takara论坛上的人一致认为Xho I切出来的黏端比较特殊
需要用平端连接条件才能连上?
诡异了~~~
在其他地方找不到相关资料
有没有人试过用Xho I做过酶切连接的?

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-23 at 13:21 ]
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lliu

新虫 (小有名气)

★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论,~
没那回事。XhoI这个位点我常规用,没有出现过任何问题。
2楼2008-11-09 06:20:03
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

谢谢楼上!
忘了设置金币
版主代我给吧
3楼2008-11-09 10:05:11
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Jinnxiang

铁虫 (初入文坛)

有用过Sal I的吗?听说这个连接效率不太好,是不是啊
如果你简单,这个世界就对你简单!
4楼2008-11-13 21:57:29
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lliu

新虫 (小有名气)

★ ★
lixiaoyi1981(金币+2,VIP+0):呵呵呵,不错
Sal I 和XhoI产生的末端完全相同,可以互相连接。

这类末端的特点可能是粘性较大,放一段时间后容易彼此自相粘连在一起(比如载体本身之间),使得与插入片段之间游离的末端减少,或者基本上消失,导致连接反应失败。我就遇到过如此的问题。刚做好的载体连接顺利,用几次后就不行了,有时还可能一个克隆都没有。

解决办法是连接反应前,一定要把载体和插入片段在一起加热数分钟,然后放入冰中,使得彼此粘连在一起的末端打开。然后再加入buffer和连接酶,按常规方法进行反应。
5楼2008-11-14 13:04:21
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zyk_527

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by lliu at 2008-11-14 13:04:
Sal I 和XhoI产生的末端完全相同,可以互相连接。

这类末端的特点可能是粘性较大,放一段时间后容易彼此自相粘连在一起(比如载体本身之间),使得与插入片段之间游离的末端减少,或者基本上消失,导致连接反应 ...

加热,多少度?
6楼2008-11-14 13:14:32
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36678293

铜虫 (正式写手)

★ ★
lixiaoyi1981(金币-2,VIP+0):下次再这样发广告贴,就重罚。
分子相关:
        亚克隆:              ≤ 1000bp           ¥  900                        
                          ≤ 2500bp           ¥ 1490         
                           2500bp-4000bp      ¥ 3900
        质粒载体改造                              ¥ 询价
        定点突变                                 
突变点数      1个      2个            3个            3个以上
          <1kb             1,000元  1,500元        2,000元          询价
             1~2kb              1,500元  2,000元        3,000元          询价
>2kb                                                询价       
客户提供:模板,详细的载体信息,载体(常见载体可提供)。         
公司提供:一份完整的技术服务报告(克隆过程中的电泳图,鉴定图,测序报告)

蛋白表达
服务项目
        服务内容   交货时间     产  物                 报  价
1~5mg      4-6周      纯度≧90%)      2000元/mg
>5mg        4-6周      纯度≧90%)        5000元+1000元/mg
说明:可承接带各种标签的蛋白(GST/HIS/TRX),同时也可承接不带任何标签的蛋白质。表达载体构建参照克隆构建相关报价。

客户提供 :1:待表达基因的序列;2:表达载体序列(图谱);3:表达克隆质粒和菌株;4:小量表达条件及结果
公司提供:
1、一份完整的技术服务报告(包括技术路线,克隆过程中的电泳图,测序报告,诱导前后目的蛋白的SDS-PAGE电泳图)
2,目的蛋白
           3:蛋白的Western Blot检测,有客户自己检测,如需我们鉴定,需提供抗体,1500元/蛋白。
多肽合成:
   同时提供多肽,小肽合成服务(20AA-100AA):
   服务内容   交货时间     产  物                 报  价
1~5mg      4-6周      纯度≧90%)      2000元/mg
>5mg        4-6周      纯度≧90%)        5000元+1000元/mg

客户提供 :1:待表达基因的序列;2:表达载体序列(图谱);3:表达克隆质粒和菌株;4:小量表达条件及结果
公司提供:
1、一份完整的技术服务报告(包括技术路线,克隆过程中的电泳图,测序报告,诱导前后目的蛋白的SDS-PAGE电泳图)
2,目的蛋白
           3:蛋白的Western Blot检测,有客户自己检测,如需我们鉴定,需提供抗体,1500元/蛋白。
联系人:胡逢春
联系QQ:36678293
7楼2008-11-16 03:17:08
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lliu

新虫 (小有名气)

楼上的,并不是任何蛋白都可以保证高表达。我随便给你几个蛋白基因,如果你能够表达到mg级水平,我给你双倍的价格。

做生意也要讲良心的。
8楼2008-11-16 06:10:08
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gr0613

铁虫 (初入文坛)

Sac I不好用,除非没有别的常用位点才用它,但是Xho I 很常用啊,效果还不错的
9楼2008-12-06 23:46:35
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

我也发现其实不难
10楼2008-12-06 23:49:30
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