应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » Xho I的黏端比较难连接？
161/2返回列表12下一页
查看: 1488  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

[交流] Xho I的黏端比较难连接？

为什么Takara论坛上的人一致认为Xho I切出来的黏端比较特殊
需要用平端连接条件才能连上？
诡异了~~~
在其他地方找不到相关资料
有没有人试过用Xho I做过酶切连接的？

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-23 at 13:21 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-11-08 19:57:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lliu

新虫 (小有名气)
★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论,~
没那回事。XhoI这个位点我常规用，没有出现过任何问题。
赞一下(10人) 回复此楼
2楼2008-11-09 06:20:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
谢谢楼上！
忘了设置金币
版主代我给吧
赞一下 回复此楼
3楼2008-11-09 10:05:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jinnxiang

铁虫 (初入文坛)
有用过Sal I的吗？听说这个连接效率不太好，是不是啊
赞一下 回复此楼
如果你简单，这个世界就对你简单！
4楼2008-11-13 21:57:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lliu

新虫 (小有名气)
★ ★
lixiaoyi1981(金币+2,VIP+0):呵呵呵，不错
Sal I 和XhoI产生的末端完全相同，可以互相连接。

这类末端的特点可能是粘性较大，放一段时间后容易彼此自相粘连在一起（比如载体本身之间），使得与插入片段之间游离的末端减少，或者基本上消失，导致连接反应失败。我就遇到过如此的问题。刚做好的载体连接顺利，用几次后就不行了，有时还可能一个克隆都没有。

解决办法是连接反应前，一定要把载体和插入片段在一起加热数分钟，然后放入冰中，使得彼此粘连在一起的末端打开。然后再加入buffer和连接酶，按常规方法进行反应。
赞一下(10人) 回复此楼
5楼2008-11-14 13:04:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zyk_527

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lliu at 2008-11-14 13:04:
Sal I 和XhoI产生的末端完全相同，可以互相连接。

这类末端的特点可能是粘性较大，放一段时间后容易彼此自相粘连在一起（比如载体本身之间），使得与插入片段之间游离的末端减少，或者基本上消失，导致连接反应 ...

加热，多少度？
回复此楼
6楼2008-11-14 13:14:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

36678293

铜虫 (正式写手)
★ ★
lixiaoyi1981(金币-2,VIP+0):下次再这样发广告贴，就重罚。
分子相关：
        亚克隆：              ≤ 1000bp           ￥  900                        
                          ≤ 2500bp           ￥ 1490         
                           2500bp-4000bp      ￥ 3900
        质粒载体改造                              ￥ 询价
        定点突变                                 
突变点数      1个      2个            3个            3个以上
          <1kb             1,000元  1,500元        2,000元          询价
             1~2kb              1,500元  2,000元        3,000元          询价
>2kb                                                询价       
客户提供：模板，详细的载体信息，载体（常见载体可提供）。         
公司提供：一份完整的技术服务报告（克隆过程中的电泳图，鉴定图，测序报告）

蛋白表达
服务项目
        服务内容   交货时间     产  物                 报  价
1～5mg      4-6周      纯度≧90%）      2000元/mg
>5mg        4-6周      纯度≧90%）        5000元＋1000元/mg
说明：可承接带各种标签的蛋白（GST/HIS/TRX），同时也可承接不带任何标签的蛋白质。表达载体构建参照克隆构建相关报价。

客户提供 ：1：待表达基因的序列；2：表达载体序列（图谱）；3：表达克隆质粒和菌株；4：小量表达条件及结果
公司提供：
1、一份完整的技术服务报告（包括技术路线，克隆过程中的电泳图，测序报告，诱导前后目的蛋白的SDS-PAGE电泳图）
2，目的蛋白
           3：蛋白的Western Blot检测，有客户自己检测，如需我们鉴定，需提供抗体，1500元/蛋白。
多肽合成：
   同时提供多肽,小肽合成服务（20AA-100AA）：
   服务内容   交货时间     产  物                 报  价
1～5mg      4-6周      纯度≧90%）      2000元/mg
>5mg        4-6周      纯度≧90%）        5000元＋1000元/mg

客户提供 ：1：待表达基因的序列；2：表达载体序列（图谱）；3：表达克隆质粒和菌株；4：小量表达条件及结果
公司提供：
1、一份完整的技术服务报告（包括技术路线，克隆过程中的电泳图，测序报告，诱导前后目的蛋白的SDS-PAGE电泳图）
2，目的蛋白
           3：蛋白的Western Blot检测，有客户自己检测，如需我们鉴定，需提供抗体，1500元/蛋白。
联系人：胡逢春
联系QQ：36678293
赞一下(10人) 回复此楼
7楼2008-11-16 03:17:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lliu

新虫 (小有名气)
楼上的，并不是任何蛋白都可以保证高表达。我随便给你几个蛋白基因，如果你能够表达到mg级水平，我给你双倍的价格。

做生意也要讲良心的。
赞一下 回复此楼
8楼2008-11-16 06:10:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gr0613

铁虫 (初入文坛)
Sac I不好用，除非没有别的常用位点才用它，但是Xho I 很常用啊，效果还不错的
赞一下 回复此楼
9楼2008-12-06 23:46:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
我也发现其实不难
赞一下 回复此楼
10楼2008-12-06 23:49:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 三磷酸腺苷 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 12/600 2026-11-05 15:25 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-05 15:24 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:24 by My20PsvIExYO
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:24 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:14 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:13 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 18/900 2026-11-05 15:13 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-05 15:03 by My20PsvIExYO
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 6/300 2026-11-05 14:06 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 8/400 2026-11-05 13:44 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 kvewwGtKktqB 2026-11-04 6/300 2026-11-05 13:22 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 9/450 2026-11-05 13:22 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 6/300 2026-11-05 12:16 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 7/350 2026-11-05 11:12 by PYZmcHr5kSaq
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 8/400 2026-11-05 10:59 by PYZmcHr5kSaq
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 10:48 by PYZmcHr5kSaq
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 10:39 by PYZmcHr5kSaq
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 9/450 2026-11-05 09:20 by PYZmcHr5kSaq
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭