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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

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[交流] Xho I的黏端比较难连接？

为什么Takara论坛上的人一致认为Xho I切出来的黏端比较特殊
需要用平端连接条件才能连上？
诡异了~~~
在其他地方找不到相关资料
有没有人试过用Xho I做过酶切连接的？

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-23 at 13:21 ]

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1楼 2008-11-08 19:57:01

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lliu

新虫 (小有名气)

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★ ★
lixiaoyi1981(金币+2,VIP+0):呵呵呵，不错

Sal I 和XhoI产生的末端完全相同，可以互相连接。

这类末端的特点可能是粘性较大，放一段时间后容易彼此自相粘连在一起（比如载体本身之间），使得与插入片段之间游离的末端减少，或者基本上消失，导致连接反应失败。我就遇到过如此的问题。刚做好的载体连接顺利，用几次后就不行了，有时还可能一个克隆都没有。

解决办法是连接反应前，一定要把载体和插入片段在一起加热数分钟，然后放入冰中，使得彼此粘连在一起的末端打开。然后再加入buffer和连接酶，按常规方法进行反应。