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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

[交流] Xho I的黏端比较难连接?

为什么Takara论坛上的人一致认为Xho I切出来的黏端比较特殊
需要用平端连接条件才能连上?
诡异了~~~
在其他地方找不到相关资料
有没有人试过用Xho I做过酶切连接的?

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-23 at 13:21 ]
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lliu

新虫 (小有名气)

★ ★
lixiaoyi1981(金币+2,VIP+0):呵呵呵,不错
Sal I 和XhoI产生的末端完全相同,可以互相连接。

这类末端的特点可能是粘性较大,放一段时间后容易彼此自相粘连在一起(比如载体本身之间),使得与插入片段之间游离的末端减少,或者基本上消失,导致连接反应失败。我就遇到过如此的问题。刚做好的载体连接顺利,用几次后就不行了,有时还可能一个克隆都没有。

解决办法是连接反应前,一定要把载体和插入片段在一起加热数分钟,然后放入冰中,使得彼此粘连在一起的末端打开。然后再加入buffer和连接酶,按常规方法进行反应。
5楼2008-11-14 13:04:21
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lliu

新虫 (小有名气)

★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论,~
没那回事。XhoI这个位点我常规用,没有出现过任何问题。
2楼2008-11-09 06:20:03
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

谢谢楼上!
忘了设置金币
版主代我给吧
3楼2008-11-09 10:05:11
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Jinnxiang

铁虫 (初入文坛)

有用过Sal I的吗?听说这个连接效率不太好,是不是啊
如果你简单,这个世界就对你简单!
4楼2008-11-13 21:57:29
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