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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » Xho I的黏端比较难连接？
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

[交流] Xho I的黏端比较难连接？

为什么Takara论坛上的人一致认为Xho I切出来的黏端比较特殊
需要用平端连接条件才能连上？
诡异了~~~
在其他地方找不到相关资料
有没有人试过用Xho I做过酶切连接的？

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-23 at 13:21 ]
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1楼 2008-11-08 19:57:01
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lliu

新虫 (小有名气)
★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论,~
没那回事。XhoI这个位点我常规用，没有出现过任何问题。
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2楼2008-11-09 06:20:03
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
谢谢楼上！
忘了设置金币
版主代我给吧
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3楼2008-11-09 10:05:11
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Jinnxiang

铁虫 (初入文坛)
有用过Sal I的吗？听说这个连接效率不太好，是不是啊
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如果你简单，这个世界就对你简单！
4楼2008-11-13 21:57:29
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lliu

新虫 (小有名气)
★ ★
lixiaoyi1981(金币+2,VIP+0):呵呵呵，不错
Sal I 和XhoI产生的末端完全相同，可以互相连接。

这类末端的特点可能是粘性较大，放一段时间后容易彼此自相粘连在一起（比如载体本身之间），使得与插入片段之间游离的末端减少，或者基本上消失，导致连接反应失败。我就遇到过如此的问题。刚做好的载体连接顺利，用几次后就不行了，有时还可能一个克隆都没有。

解决办法是连接反应前，一定要把载体和插入片段在一起加热数分钟，然后放入冰中，使得彼此粘连在一起的末端打开。然后再加入buffer和连接酶，按常规方法进行反应。
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5楼2008-11-14 13:04:21
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zyk_527

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lliu at 2008-11-14 13:04:
Sal I 和XhoI产生的末端完全相同，可以互相连接。

这类末端的特点可能是粘性较大，放一段时间后容易彼此自相粘连在一起（比如载体本身之间），使得与插入片段之间游离的末端减少，或者基本上消失，导致连接反应 ...

加热，多少度？
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6楼2008-11-14 13:14:32
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36678293

铜虫 (正式写手)
★ ★
lixiaoyi1981(金币-2,VIP+0):下次再这样发广告贴，就重罚。
分子相关：
        亚克隆：              ≤ 1000bp           ￥  900                        
                          ≤ 2500bp           ￥ 1490         
                           2500bp-4000bp      ￥ 3900
        质粒载体改造                              ￥ 询价
        定点突变                                 
突变点数      1个      2个            3个            3个以上
          <1kb             1,000元  1,500元        2,000元          询价
             1~2kb              1,500元  2,000元        3,000元          询价
>2kb                                                询价       
客户提供：模板，详细的载体信息，载体（常见载体可提供）。         
公司提供：一份完整的技术服务报告（克隆过程中的电泳图，鉴定图，测序报告）

蛋白表达
服务项目
        服务内容   交货时间     产  物                 报  价
1～5mg      4-6周      纯度≧90%）      2000元/mg
>5mg        4-6周      纯度≧90%）        5000元＋1000元/mg
说明：可承接带各种标签的蛋白（GST/HIS/TRX），同时也可承接不带任何标签的蛋白质。表达载体构建参照克隆构建相关报价。

客户提供 ：1：待表达基因的序列；2：表达载体序列（图谱）；3：表达克隆质粒和菌株；4：小量表达条件及结果
公司提供：
1、一份完整的技术服务报告（包括技术路线，克隆过程中的电泳图，测序报告，诱导前后目的蛋白的SDS-PAGE电泳图）
2，目的蛋白
           3：蛋白的Western Blot检测，有客户自己检测，如需我们鉴定，需提供抗体，1500元/蛋白。
多肽合成：
   同时提供多肽,小肽合成服务（20AA-100AA）：
   服务内容   交货时间     产  物                 报  价
1～5mg      4-6周      纯度≧90%）      2000元/mg
>5mg        4-6周      纯度≧90%）        5000元＋1000元/mg

客户提供 ：1：待表达基因的序列；2：表达载体序列（图谱）；3：表达克隆质粒和菌株；4：小量表达条件及结果
公司提供：
1、一份完整的技术服务报告（包括技术路线，克隆过程中的电泳图，测序报告，诱导前后目的蛋白的SDS-PAGE电泳图）
2，目的蛋白
           3：蛋白的Western Blot检测，有客户自己检测，如需我们鉴定，需提供抗体，1500元/蛋白。
联系人：胡逢春
联系QQ：36678293
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7楼2008-11-16 03:17:08
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lliu

新虫 (小有名气)
楼上的，并不是任何蛋白都可以保证高表达。我随便给你几个蛋白基因，如果你能够表达到mg级水平，我给你双倍的价格。

做生意也要讲良心的。
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8楼2008-11-16 06:10:08
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gr0613

铁虫 (初入文坛)
Sac I不好用，除非没有别的常用位点才用它，但是Xho I 很常用啊，效果还不错的
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9楼2008-12-06 23:46:35
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
我也发现其实不难
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10楼2008-12-06 23:49:30
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