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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR Ct值
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L笨小孩

铜虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量PCR Ct值 已有7人参与

我做了相同的稀释倍数后发现目的基因的Ct值好多都是三十多，而内参基因的都是二十多，请问这样的数据能用吗？
做荧光定量PCR，目的基因和内参基因的模板稀释倍数一定要一样吗？不一样的话，比如目的基因模板稀释10倍，内参不稀释，这样可行吗？
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1楼 2016-06-24 19:58:33
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棍子168

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-25 08:41:11
xn8008: 应助指数+1 2016-06-25 08:47:22
Ct值好多都是三十多，而内参基因的都是二十多，说明你的目的基因表达量也太少了吧，目的基因和内参基因的模板稀释倍数一定要一样吧，要不然没有意义吧
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天道酬勤
2楼2016-06-24 20:06:12
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普通回帖

Harper_sun

木虫 (正式写手)
当然得一样，要不你跑内参基因干啥？

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3楼2016-06-24 23:04:19
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-25 08:41:41
xn8008: 应助指数+1 2016-06-25 08:47:31
Ct30以后就不准了，不能用。稀释倍数必需一样，像你这样的最好换一个表达量第一点的内参基因。
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4楼2016-06-25 07:40:12
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ldx832

新虫 (初入文坛)
只要你30多的目的基因能和阴性分开就可以用啊，目的基因和内参基因的CT大多数情况是不一样的。稀释倍数一定要一致，加内参的目的就是在相同模板里你的目的基因和内参基因分别是多少，然后用内参基因来标定目标基因的量（内参基因视为表达量为不变）。

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5楼2016-06-25 08:55:05
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L笨小孩

铜虫 (初入文坛)
内参-p30d         24.50        目的基因p30d    32.68
内参-p30d         24.34        目的基因p30d    32.62
内参-p30d         24.30        目的基因p30d    32.39

内参-p40d          24.73        目的基因p40d     33.37
内参-p40d         26.11        目的基因p40d     34.40
内参-p40d         25.69        目的基因p40d     34.82
这是我的部分数据，是不是我目的基因表达量太低了，还能不能用来做荧光定量PCR?
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6楼2016-06-25 15:04:31
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材料科技

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Ct值和pcr管有很大关系，相同试剂，有的pcr管ct值大，有的小一些。
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7楼2016-06-27 11:07:33
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L笨小孩

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 材料科技 at 2016-06-27 11:07:33
Ct值和pcr管有很大关系，相同试剂，有的pcr管ct值大，有的小一些。

我们用的都是和仪器配套的八连管，我想这个应影响不大。有点人用的不是仪器配套的PCR管做的数据也很漂亮。
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8楼2016-06-28 09:40:56
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意萧02

木虫 (正式写手)
1，表达量低可能会出现这种情况，2，设计的引物扩出来的曲线是否正常？3，换其他ROX的酶试试

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9楼2016-06-28 19:30:09
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L笨小孩

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 意萧02 at 2016-06-28 19:30:09
1，表达量低可能会出现这种情况，2，设计的引物扩出来的曲线是否正常？3，换其他ROX的酶试试

左边的峰是内参基因，右边的峰是目的基因
荧光定量PCR  Ct值
melt peak.png
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10楼2016-06-29 10:52:28
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