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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求教质粒构建后如何做定点突变
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549088894

新虫 (小有名气)

[交流] 求教质粒构建后如何做定点突变 已有11人参与

大神们，求教质粒构建后如何做定点突变，两个位点之间相差5个bp，想分别对两个位置做单位点突变以及双位点突变，有没有啥好的建议？有看到有天根，全式金，碧云天的定点突变试剂盒，有没有大神有用过的，求分享下经验？有没有哪个试剂盒突变效率好一点的，谢谢

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1楼 2016-06-15 14:57:43
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

starseacow

专家顾问 (职业作家)
★
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欢迎参考
SDM-Assist software to design site-directed mutagenesis primers introducing “silent” restriction sites
BMC Bioinformatics201314:105
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
6楼2016-06-16 17:30:08
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
丢给我做吧⊙▽⊙最擅长做点突变啦

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13楼2016-06-18 13:59:54
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普通回帖

liuyuxue

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
定点突变的话就设计一对引物做RF克隆，一步就搞定了
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花落人亡两不知
2楼2016-06-15 15:02:41
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549088894

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuyuxue at 2016-06-15 15:02:41
定点突变的话就设计一对引物做RF克隆，一步就搞定了

RF克隆？不需要买试剂盒？这个是不是在pcr产物上突变，在连接转化的？我想直接在质粒上做突变，前期这个连接构建做了好久了，好不容易做成功

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3楼2016-06-15 15:05:36
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liuyuxue

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-16 17:45:52
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3楼: Originally posted by 549088894 at 2016-06-15 15:05:36
RF克隆？不需要买试剂盒？这个是不是在pcr产物上突变，在连接转化的？我想直接在质粒上做突变，前期这个连接构建做了好久了，好不容易做成功
...

RF克隆不需要连接，用设计的突变引物，载体为模板进行PCR，产物笑话之后转化就OK
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花落人亡两不知
4楼2016-06-16 07:41:03
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549088894

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by liuyuxue at 2016-06-16 07:41:03
RF克隆不需要连接，用设计的突变引物，载体为模板进行PCR，产物笑话之后转化就OK...

能否细说一下怎么操作，非常感谢

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5楼2016-06-16 08:08:28
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娟恋幸福

新虫 (小有名气)
★ ★
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xn8008: 金币+1, 感谢提出有意义的帖子 2016-06-17 06:58:42
在你要突变的地方设计引物做重叠PCR

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7楼2016-06-16 22:38:38
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选择远方523

新虫 (初入文坛)
重叠pcr，刚做过

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8楼2016-06-17 00:05:16
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625351163

铜虫 (初入文坛)
★
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将突变位点设计到引物里面，扩增出来的片段就是突变片段，我也是刚刚做过，突变质粒克隆成功了
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9楼2016-06-17 08:41:58
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丫头的格格巫

新虫 (初入文坛)
★
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8楼: Originally posted by 选择远方523 at 2016-06-17 00:05:16
重叠pcr，刚做过

我最近也在做重叠延伸pcr_可是一直叠不上，要么叠的就是假阳性，楼主有没有比较好的经验？

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10楼2016-06-17 09:14:20
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