24小时热门版块排行榜    

查看: 4654  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

549088894

新虫 (小有名气)

[交流] 求教质粒构建后如何做定点突变 已有11人参与

大神们,求教质粒构建后如何做定点突变,两个位点之间相差5个bp,想分别对两个位置做单位点突变以及双位点突变,有没有啥好的建议?有看到有天根,全式金,碧云天的定点突变试剂盒,有没有大神有用过的,求分享下经验?有没有哪个试剂盒突变效率好一点的,谢谢

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

549088894

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by liuyuxue at 2016-06-16 07:41:03
RF克隆不需要连接,用设计的突变引物,载体为模板进行PCR,产物笑话之后转化就OK...

能否细说一下怎么操作,非常感谢

发自小木虫IOS客户端
5楼2016-06-16 08:08:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

liuyuxue

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
定点突变的话就设计一对引物做RF克隆,一步就搞定了
花落人亡两不知
2楼2016-06-15 15:02:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

549088894

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liuyuxue at 2016-06-15 15:02:41
定点突变的话就设计一对引物做RF克隆,一步就搞定了

RF克隆?不需要买试剂盒?这个是不是在pcr产物上突变,在连接转化的?我想直接在质粒上做突变,前期这个连接构建做了好久了,好不容易做成功

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-06-15 15:05:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyuxue

铁杆木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-16 17:45:52
引用回帖:
3楼: Originally posted by 549088894 at 2016-06-15 15:05:36
RF克隆?不需要买试剂盒?这个是不是在pcr产物上突变,在连接转化的?我想直接在质粒上做突变,前期这个连接构建做了好久了,好不容易做成功
...

RF克隆不需要连接,用设计的突变引物,载体为模板进行PCR,产物笑话之后转化就OK
花落人亡两不知
4楼2016-06-16 07:41:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见