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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求教质粒构建后如何做定点突变
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
去invitrogen的网站搜quickchange试剂盒，有设计突变引物的软件，用软件设计好后，直接定引物突变，不需要试剂盒。
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11楼2016-06-17 09:33:15
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选择远方523

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 丫头的格格巫 at 2016-06-17 09:14:20
我最近也在做重叠延伸pcr_可是一直叠不上，要么叠的就是假阳性，楼主有没有比较好的经验？
...

什么叫假阳性。

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12楼2016-06-17 12:56:08
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
丢给我做吧⊙▽⊙最擅长做点突变啦

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13楼2016-06-18 13:59:54
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MMCCBB

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by 选择远方523 at 2016-06-17 12:56:08
什么叫假阳性。
...

可能你的PCR模板浓度太高，稀释模板浓度到5ng/ul,然后PCR。得到定点突变PCR产物后再消化一下转化，这样成功率挺高的

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14楼2016-06-19 00:09:44
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sayen

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
pcr载体理论上可行，实际不能保证不突变

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15楼2016-06-19 09:22:16
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sangtian

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
重新设计定点突变的引物，已构建好的载体做模板，之后用Dpni酶处理一下，转化就可以了

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16楼2016-06-20 09:00:47
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