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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求教质粒构建后如何做定点突变
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549088894

新虫 (小有名气)

[交流] 求教质粒构建后如何做定点突变 已有11人参与

大神们，求教质粒构建后如何做定点突变，两个位点之间相差5个bp，想分别对两个位置做单位点突变以及双位点突变，有没有啥好的建议？有看到有天根，全式金，碧云天的定点突变试剂盒，有没有大神有用过的，求分享下经验？有没有哪个试剂盒突变效率好一点的，谢谢

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1楼 2016-06-15 14:57:43
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sangtian

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
重新设计定点突变的引物，已构建好的载体做模板，之后用Dpni酶处理一下，转化就可以了

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16楼2016-06-20 09:00:47
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liuyuxue

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
定点突变的话就设计一对引物做RF克隆，一步就搞定了
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花落人亡两不知
2楼2016-06-15 15:02:41
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549088894

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuyuxue at 2016-06-15 15:02:41
定点突变的话就设计一对引物做RF克隆，一步就搞定了

RF克隆？不需要买试剂盒？这个是不是在pcr产物上突变，在连接转化的？我想直接在质粒上做突变，前期这个连接构建做了好久了，好不容易做成功

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3楼2016-06-15 15:05:36
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liuyuxue

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-16 17:45:52
引用回帖:
3楼: Originally posted by 549088894 at 2016-06-15 15:05:36
RF克隆？不需要买试剂盒？这个是不是在pcr产物上突变，在连接转化的？我想直接在质粒上做突变，前期这个连接构建做了好久了，好不容易做成功
...

RF克隆不需要连接，用设计的突变引物，载体为模板进行PCR，产物笑话之后转化就OK
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花落人亡两不知
4楼2016-06-16 07:41:03
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