应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR为阳，双酶切鉴定无目的条带！！！！
151/2返回列表12下一页
查看: 2272  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

csadxm521

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽

» 猜你喜欢
1楼 2016-06-13 15:07:51
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 支持积极回帖 2016-06-13 18:37:21
一方面你可以跑一个未酶切的质粒在旁边作为对照，看看你所谓的两条带是不是没有酶切开的质粒。另外可以尝试用特异性引物对提取的质粒进行pcr验证，同时拿pet空载做阴性对照，可以扩增你目的片段的模板作为阳性对照，这样来验证也可，祝好！

发自小木虫Android客户端
赞一下(2人) 回复此楼
天空才是极限，我有信心飞的更高！
5楼2016-06-13 18:33:42
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小周

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 支持积极回帖 2016-06-13 18:37:05
认为你的PCR没问题，就挑两三个直接测序去。别纠结
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2016-06-13 15:17:17
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎积极回应问题 2016-06-18 08:14:28
PCR鉴定为阳性，酶切不出条带。
这个问题出在，PCR是假阳性，如果你的PCR引物用的都是你的目的基因上的话。消除PCR假阳性，引物最好一条是你基因上的，一条在载体上

还有把你PCR的电泳图谱发上来看看，假阳性可以看得出来
赞一下(1人) 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
12楼2016-06-16 02:45:55
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

小周

铁杆木虫 (著名写手)
Marker 不一定准。
回复此楼
3楼2016-06-13 15:18:33
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苏莫离

新虫 (初入文坛)
建议查看载体图谱，确认酶没有用错。另外看看酶的用量或者质粒的用量有没有问题

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-06-13 16:01:08
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄启秀

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎积极回帖，提出有意义的意见 2016-06-18 08:12:50
我也遇到相似问题  现在想尝试扩大提取质粒量  获得质量浓度都比较好的质粒后  先做质粒PCR，再进行酶切～

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-06-13 23:36:34
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小彬彬1991

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-06-15 22:53:45
xn8008: 金币+1, 应助指数+1 2016-06-18 08:13:58
建议换两个酶切位点，在载体上再找两个，位于你目的片段的两端，有的时候用你构建时的那两种酶的话，可能酶切鉴定的时候不容易切开。另外酶切时可以多切一段时间，现在的快切酶说的时间挺短的，个人感觉切不完全。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
实验做出来的是结果，做不出来就只是实验。
7楼2016-06-14 11:06:40
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Fiona鳯

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
将10个阳性克隆扩菌后直接送去测序试试看
赞一下 回复此楼
8楼2016-06-14 13:18:47
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

werq63

金虫 (著名写手)
分析一下整个质粒的序列，最好一个是载体上一个是基因上

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2016-06-15 22:08:14
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

werq63

金虫 (著名写手)
或者重新自连一下载体，看看载体会不会自连

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2016-06-15 22:08:56
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 csadxm521 的主题更新
151/2返回列表12下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金中了 +8 laoda193707 2026-08-06 8/400 2026-08-07 07:37 by emeraldine
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ANUsWpSnuWQD 2026-08-06 4/200 2026-08-07 04:46 by nSM3ys5fefM3
[基金申请] 听说今天filecode变了 +19 布布和一二 2026-08-06 34/1700 2026-08-07 03:13 by 虫友是什么虫
[基金申请] filecode +10 等待解的谜 2026-08-06 14/700 2026-08-06 21:16 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +3 archvillain 2026-08-06 7/350 2026-08-06 21:05 by archvillain
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 6/300 2026-08-06 20:19 by 苏知砚
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[教师之家] 咨询面上基金 +4 李长云 2026-07-31 7/350 2026-08-06 11:20 by 李长云
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +22 低垂的野花 2026-07-31 30/1500 2026-08-05 18:03 by 低垂的野花
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[论文投稿] 十年后又回来了，论文投稿求助 +3 哈哈114477 2026-08-01 3/150 2026-08-04 15:40 by tegsgjy20
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭