| 查看: 1407 | 回复: 6 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
zy晨曦新虫 (小有名气)
|
[交流]
自己的初次蛋白纯化实验 已有2人参与
|
||
|
通过上一次的蛋白纯化，发现酶活的回收率低（目前没有着重考察纯度的问题），所以今天通过降低ph来考察酶活的回收率的问题。通过一天的不间断的实验，发现降低ph能快速洗脱目的蛋白，但是纯化还没有测定。先说说具体的步骤吧。 首先调整了弱阴离子树脂的ph为7.0，还是将树脂倒出然后直接调ph的方法，粗糙而又快速的方法。 调整酶液的ph有点问题，因为利用3M盐酸调整会出现浑浊，主要是因为强酸会导致局部ph过低，酶变性了。所以我利用0.05m的磷酸氢二钾调整ph。成功。 上柱300ml，比上次的柱子上的酶液体积多了100ml，但是酶活略微低于上一个酶液。总体算来，两者的上样量差不多。但是洗脱规律却差了很多 0.2m氯化钠就能洗脱出30%的目的蛋白，0.3m氯化钠在第一个0.5BV时就洗脱出45%的目的蛋白，虽然心里在怀疑这个ph不适合，但是毕竟洗脱出来的酶活高，浓度大，接着0.3M洗脱的第二个0.5BV就没有酶活了，说明洗脱过快。如果可以下次应该改用0.25M洗脱了。接下来的0.4M就没有洗脱出来蛋白。基本在0.3M就洗脱出来了全部的蛋白，但是还是有20%左右的酶活不知道在哪里？酶在和我玩捉迷藏，而树脂一直帮着它，我是孤家寡人了。 |
回复此楼» 猜你喜欢
厉娜
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有12人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有15人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有14人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有16人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有15人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有10人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有12人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有8人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有8人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 转染实验要注意的一些问题
已经有8人回复
- 关于提纯小分子多肽pyoverdines除盐的问题
已经有7人回复
zy晨曦
新虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2258.4
- 散金: 10
- 红花: 1
- 帖子: 205
- 在线: 77.5小时
- 虫号: 1755080
- 注册: 2012-04-14
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
7楼2016-06-12 20:14:40
hc-material
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +702 - BioEPI: 1
- 应助: 517 (博士)
- 金币: 468.5
- 散金: 18028
- 红花: 313
- 帖子: 3594
- 在线: 518.9小时
- 虫号: 4027804
- 注册: 2015-08-18
- 性别: GG
- 专业: 核技术及其应用
- 管辖: 生物科学
zy晨曦2楼2016-06-07 10:09:46
璧月
捐助贵宾 (正式写手)
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 4908.9
- 散金: 250
- 红花: 3
- 帖子: 424
- 在线: 164.7小时
- 虫号: 158806
- 注册: 2006-01-07
- 性别: MM
- 专业: 细胞生理学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
没弄明白为什么把填料弄出来换ph环境？离子交换两种洗脱方法，盐洗脱和ph洗脱。盐是改变环境电导，ph是改变蛋白带电。直接往柱子里泵缓冲液就可以的，为什么要拆出来呢？ 发自小木虫Android客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
3楼2016-06-09 14:22:51
zy晨曦
新虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2258.4
- 散金: 10
- 红花: 1
- 帖子: 205
- 在线: 77.5小时
- 虫号: 1755080
- 注册: 2012-04-14
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
4楼2016-06-11 20:03:55
