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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 这个图对么？？
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wy604987664

新虫 (小有名气)

[求助] 这个图对么？？ 已有2人参与

提质粒pcr，质粒稀释10倍，左边点的pcr产物，右边是原液质粒，这个图对么？片段大小，maker左右为1450左右右边为987，有人给我说质粒应该是3条带，所以我不确定

这个图对么？？


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1楼 2016-05-31 15:36:50
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒DNA和PCR原液对比？PCR扩增的是什么？质粒的大小应该是你PCR长度加上载体长度。原则上来说，你可能会跑出三条带，超螺旋、线性和环状。但实际中一般不会出现三条带。
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2楼2016-05-31 22:00:07
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

最保险的，是拿质粒上的探针和你片段的探针，扩增。鉴定。
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3楼2016-05-31 22:00:56
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wy604987664

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 晞朔 at 2016-05-31 22:00:56
最保险的，是拿质粒上的探针和你片段的探针，扩增。鉴定。

质粒原液跟稀释质粒pcr产物，pcr时用的引物是我的特异引物，有人给我说3条带我就只有2条，所以不确定

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4楼2016-05-31 23:59:54
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miega

银虫 (小有名气)
质粒有三种形态，一至三条带的情况都是正常的，一般两条带的情况较多，还有非线性的DNA是不能用marker比较大小的

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5楼2016-06-01 00:28:48
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wy604987664

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by miega at 2016-06-01 00:28:48
质粒有三种形态，一至三条带的情况都是正常的，一般两条带的情况较多，还有非线性的DNA是不能用marker比较大小的

所以说我这是对的咯，谢谢呢

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6楼2016-06-01 00:31:16
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miega

银虫 (小有名气)
你提的质粒没问题

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7楼2016-06-01 00:46:56
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)
质粒对不对做双酶切是最合适的，如果经费足够时间充足做测序是最好的。如果是重组质粒，可以用双酶切以及T7引物与目的基因引物一起做pcr，基本上就可以确定重组有没有构建成功了。

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8楼2016-06-01 22:55:28
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)
质粒理论上是有三条带，但实际上条带数和提取试剂和方法有很大的关系，手工提取可能会出现几条条带，试剂盒一般只有一条。保险的方法是做双酶切，然后与完整质粒、空质粒双酶切和目的片段作为对照一起跑胶。

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9楼2016-06-01 22:59:10
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寻找1

新虫 (正式写手)
质粒不一定能跑出三条带呀

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10楼2016-06-03 23:50:27
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