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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wy604987664

新虫 (小有名气)

[求助] 这个图对么?? 已有2人参与

提质粒pcr,质粒稀释10倍,左边点的pcr产物,右边是原液质粒,这个图对么?片段大小,maker左右为1450左右右边为987,有人给我说质粒应该是3条带,所以我不确定

这个图对么??


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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒DNA和PCR原液对比?PCR扩增的是什么?质粒的大小应该是你PCR长度加上载体长度。原则上来说,你可能会跑出三条带,超螺旋、线性和环状。但实际中一般不会出现三条带。
2楼2016-05-31 22:00:07
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

最保险的,是拿质粒上的探针和你片段的探针,扩增。鉴定。
3楼2016-05-31 22:00:56
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wy604987664

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 晞朔 at 2016-05-31 22:00:56
最保险的,是拿质粒上的探针和你片段的探针,扩增。鉴定。

质粒原液跟稀释质粒pcr产物,pcr时用的引物是我的特异引物,有人给我说3条带我就只有2条,所以不确定

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4楼2016-05-31 23:59:54
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miega

银虫 (小有名气)

质粒有三种形态,一至三条带的情况都是正常的,一般两条带的情况较多,还有非线性的DNA是不能用marker比较大小的

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5楼2016-06-01 00:28:48
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wy604987664

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by miega at 2016-06-01 00:28:48
质粒有三种形态,一至三条带的情况都是正常的,一般两条带的情况较多,还有非线性的DNA是不能用marker比较大小的

所以说我这是对的咯,谢谢呢

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6楼2016-06-01 00:31:16
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miega

银虫 (小有名气)

7楼2016-06-01 00:46:56
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)

质粒对不对做双酶切是最合适的,如果经费足够时间充足做测序是最好的。如果是重组质粒,可以用双酶切以及T7引物与目的基因引物一起做pcr,基本上就可以确定重组有没有构建成功了。

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8楼2016-06-01 22:55:28
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)

质粒理论上是有三条带,但实际上条带数和提取试剂和方法有很大的关系,手工提取可能会出现几条条带,试剂盒一般只有一条。保险的方法是做双酶切,然后与完整质粒、空质粒双酶切和目的片段作为对照一起跑胶。

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9楼2016-06-01 22:59:10
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寻找1

新虫 (正式写手)

质粒不一定能跑出三条带呀

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10楼2016-06-03 23:50:27
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