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Dugutoufu铜虫 (初入文坛)
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运用crispr/cas9进行基因敲除，pCas质粒总是无法转进感受态中，求大神的指导啊~ 已有2人参与
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产气肠杆菌与大肠杆菌的同源性很高，理论上可以进行crispr基因敲除，但是我将pCas电转了很多次，还是转不进去，制备的感受态没有问题，质粒浓度大约200ng，电转的条件是：2200V，200Ω，25uF，2mm的电转杯，电转时间大概在5毫秒左右，菌体在抗性板上长，抗性板是kan50，大约18个小时之后能长出菌落。挑取单菌落在同样抗性的液体里也能长，但是再提取质粒验证时，完全提不出来，想请问各路大神这是什么原因啊？做了两个月~~ 求大神们提提意见 @youlinglyw@wizardfan@飞约疯人院@biostar2009 |
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kan没有失效呢～我的质粒有点大，12.5k 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2016-05-26 19:29:16
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