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Dugutoufu

铜虫 (初入文坛)

[求助] 运用crispr/cas9进行基因敲除,pCas质粒总是无法转进感受态中,求大神的指导啊~ 已有2人参与

产气肠杆菌与大肠杆菌的同源性很高,理论上可以进行crispr基因敲除,但是我将pCas电转了很多次,还是转不进去,制备的感受态没有问题,质粒浓度大约200ng,电转的条件是:2200V,200Ω,25uF,2mm的电转杯,电转时间大概在5毫秒左右,菌体在抗性板上长,抗性板是kan50,大约18个小时之后能长出菌落。挑取单菌落在同样抗性的液体里也能长,但是再提取质粒验证时,完全提不出来,想请问各路大神这是什么原因啊?做了两个月~~求大神们提提意见@youlinglyw@wizardfan@飞约疯人院@biostar2009
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Dugutoufu

铜虫 (初入文坛)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-15 07:59:03
引用回帖:
3楼: Originally posted by 黄小萌萌 at 2016-05-26 10:44:31
卡那霉素做抗生素合理吗?这个菌本身有没有这个抗性基因?

这个菌本身是氨苄抗性,pCas是kan抗性,所以不会出现抗性不相容的问题

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5楼2016-05-26 19:31:03
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黄小萌萌

银虫 (小有名气)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-15 07:58:02
抗生素有没有失效啊?

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2楼2016-05-26 10:43:35
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黄小萌萌

银虫 (小有名气)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-15 07:58:08
卡那霉素做抗生素合理吗?这个菌本身有没有这个抗性基因?

发自小木虫Android客户端
3楼2016-05-26 10:44:31
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Dugutoufu

铜虫 (初入文坛)

★ ★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-15 07:58:14
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-15 07:58:33
引用回帖:
2楼: Originally posted by 黄小萌萌 at 2016-05-26 10:43:35
抗生素有没有失效啊?

kan没有失效呢~我的质粒有点大,12.5k

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4楼2016-05-26 19:29:16
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