应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 运用crispr/cas9进行基因敲除，pCas质粒总是无法转进感受态中，求大神的指导啊~
162/2返回列表上一页12
查看: 5207  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

没做过这个，但是我觉得道理相通：
一般电转之后摇菌，提质粒的效果不如大肠杆菌提的质粒效果好，
尤其是拷贝数低的时候，所以，你可以加大电转后菌液的量再提取。
其实电转后提的质粒，即使你跑胶看不到条带，也可能已经提出来了。
你可以直接用质粒进行PCR验证，看是否p出目标条带。
赞一下(3人) 回复此楼
11楼2016-08-14 13:04:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孤城画角

铜虫 (小有名气)
你好，请问一下你最后转进去了没有，因为我也遇到了同样的问题，希望能相互交流一下。
赞一下 回复此楼
12楼2016-11-05 10:16:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2015202650

新虫 (初入文坛)
楼主可以向您求一下质粒吗？之前用的Red重组做了半年多一直失败。想试试cas9
赞一下 回复此楼
13楼2018-01-30 19:16:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莫落

木虫 (正式写手)
同意11楼，你可以加大菌量，多合并几管进行小提。当然如果只是验证质粒在不在，可以用菌落PCR。另外还要注意这个质粒要求菌的生长条件为30摄氏度。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
14楼2018-01-30 21:09:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

有一种可能，只是猜想。origin of replication不兼容，在大肠杆菌复制的质粒，在产气肠杆菌未必。
赞一下 回复此楼
Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
15楼2018-01-31 01:15:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

渴望飞的鱼

新虫 (初入文坛)
您好，前辈。我想问一下您用来鉴定pCas质粒的引物是什么呢？大约大约能扩增出多少bp的条带呢？您用的PCR程序是怎么的呢？我也在鉴定这个质粒，但是更据引物却没能扩增出条带来，估计是我的PCR程序不正确。所以想请教一下您的引物和程序。
赞一下 回复此楼
16楼2018-03-09 13:25:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Dugutoufu 的主题更新
162/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 7/350 2026-11-01 12:40 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 6/300 2026-11-01 12:40 by BCdvBAEpt3zm
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 4/200 2026-11-01 12:38 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 12:38 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 17/850 2026-11-01 12:24 by BCdvBAEpt3zm
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 12/600 2026-11-01 12:19 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 13/650 2026-11-01 12:14 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 5/250 2026-11-01 11:18 by Equinoxhua
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-01 11:14 by BCdvBAEpt3zm
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-01 11:09 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 9/450 2026-11-01 10:53 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-01 10:27 by BCdvBAEpt3zm
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 26/1300 2026-11-01 10:22 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 21/1050 2026-11-01 06:46 by YXM1FDCSE8Bn
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 15/750 2026-11-01 05:22 by YXM1FDCSE8Bn
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 03:59 by YXM1FDCSE8Bn
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 6/300 2026-11-01 03:56 by YXM1FDCSE8Bn
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 12/600 2026-11-01 02:19 by YXM1FDCSE8Bn
[硕博家园] 申博自荐 2篇一区TOP+1篇EI+2公开发明专利 2027博士申请 +3 小小阿光 2026-10-27 3/150 2026-10-29 23:56 by 起风了的快乐
[文学芳草园] 闲聊 +3 myrtle 2026-10-25 6/300 2026-10-29 15:28 by myrtle
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭