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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 运用crispr/cas9进行基因敲除，pCas质粒总是无法转进感受态中，求大神的指导啊~
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不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

没做过这个，但是我觉得道理相通：
一般电转之后摇菌，提质粒的效果不如大肠杆菌提的质粒效果好，
尤其是拷贝数低的时候，所以，你可以加大电转后菌液的量再提取。
其实电转后提的质粒，即使你跑胶看不到条带，也可能已经提出来了。
你可以直接用质粒进行PCR验证，看是否p出目标条带。
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11楼2016-08-14 13:04:43
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孤城画角

铜虫 (小有名气)
你好，请问一下你最后转进去了没有，因为我也遇到了同样的问题，希望能相互交流一下。
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12楼2016-11-05 10:16:23
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2015202650

新虫 (初入文坛)
楼主可以向您求一下质粒吗？之前用的Red重组做了半年多一直失败。想试试cas9
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13楼2018-01-30 19:16:49
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莫落

木虫 (正式写手)
同意11楼，你可以加大菌量，多合并几管进行小提。当然如果只是验证质粒在不在，可以用菌落PCR。另外还要注意这个质粒要求菌的生长条件为30摄氏度。

发自小木虫IOS客户端
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14楼2018-01-30 21:09:35
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

有一种可能，只是猜想。origin of replication不兼容，在大肠杆菌复制的质粒，在产气肠杆菌未必。
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
15楼2018-01-31 01:15:30
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渴望飞的鱼

新虫 (初入文坛)
您好，前辈。我想问一下您用来鉴定pCas质粒的引物是什么呢？大约大约能扩增出多少bp的条带呢？您用的PCR程序是怎么的呢？我也在鉴定这个质粒，但是更据引物却没能扩增出条带来，估计是我的PCR程序不正确。所以想请教一下您的引物和程序。
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16楼2018-03-09 13:25:44
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