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mike546

至尊木虫 (正式写手)

Haha

[求助] 关于引物设计/荧光定量PCR的几个问题请教一下大家 已有1人参与

楼主环境专业,初次接触分子实验,提的是植物的RNA,然后反转录成cDNA,再去荧光定量有几个问题想请教一下大家:
(1)提出RNA之后,测了OD260,然后控制每个样品RNA浓度一致,那反转录后还要测280260的比值吗,不测的话,反转录过程会不会有影响?测的话那之前的RNA 的OD260可以不测嘛
(2)引物设计的时候,在NCBI上,进入某个基因的mRNA的详细信息,要把序列复制到设计软件上,那这个序列是这条mRNA的整段序列还是点一下“CDS”然后下面有颜色标注的那一段呢?
(3)如果想做土壤里面的基因,按照这个路线然后去荧光定量可行吗?直接用提DNA的试剂盒提取土壤的DNA为什么不能拿去荧光定量呢?

几个很小白的问题,初次接触,大家见笑了,恳请大家帮帮忙,感激不尽!
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Hiahiahiahia
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mike546

至尊木虫 (正式写手)

Haha

引用回帖:
3楼: Originally posted by 瘸腿老马 at 2016-05-20 11:17:56
问题2,只做定量都可以,那个部位没有区别但序列对PCR影响非常大!

你好,您的意思是就选颜色标注的那一段就可以了吗
Hiahiahiahia
6楼2016-05-20 12:44:06
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瘸腿老马

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
问题1,一般只用分光光度计测RNA不测RT后的cDNA,RT后的cDNA要用PCR检测
2楼2016-05-20 11:14:22
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瘸腿老马

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

问题2,只做定量都可以,那个部位没有区别但序列对PCR影响非常大!
3楼2016-05-20 11:17:56
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瘸腿老马

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-05 06:41:15
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 支持发帖交流 2016-07-05 07:19:57
问题3,用RNA-cDNA可以做定量,直接用DNA也可以做定量,取决于你的目的和样品的丰度是否足够。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2016-05-20 11:23:23
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