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1135482512

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 拖尾

为什么一直拖尾，试了很多了，还这样

拖尾


拖尾-1


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1楼 2016-05-17 22:15:05
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烟草书生

新虫 (初入文坛)
换引物
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2楼2016-05-17 23:23:10
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科学小覃

木虫 (正式写手)
可能模版加多了
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生物科学
3楼2016-05-18 07:36:09
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1135482512

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 科学小覃 at 2016-05-18 07:36:09
可能模版加多了

模版我都试了，不起作用了

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4楼2016-05-18 07:45:27
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科学小覃

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 1135482512 at 2016-05-18 07:45:27
模版我都试了，不起作用了
...

提高退火温度看看
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生物科学
5楼2016-05-19 07:20:41
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1135482512

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 科学小覃 at 2016-05-19 07:20:41
提高退火温度看看...

退火我也提高了，你说是不是退火太高？

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6楼2016-05-19 08:59:27
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PennieChueng

木虫 (小有名气)
你延伸时间加长，我以前遇到过，我试过12min可以了

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7楼2016-05-19 09:21:17
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1135482512

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by PennieChueng at 2016-05-19 09:21:17
你延伸时间加长，我以前遇到过，我试过12min可以了

可是我的片段只有250bp左右

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8楼2016-05-19 09:30:48
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PennieChueng

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 1135482512 at 2016-05-19 09:30:48
可是我的片段只有250bp左右
...

我不知道，我以前也是安这种方法做的，回来用的是其他实验室的方法，不过我做的是用quick change的方法做deletion.不过我建议你适当延长试一下！

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9楼2016-05-19 09:35:10
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wangwnehu

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by PennieChueng at 2016-05-19 09:35:10
我不知道，我以前也是安这种方法做的，回来用的是其他实验室的方法，不过我做的是用quick change的方法做deletion.不过我建议你适当延长试一下！
...

当引物特异性差或引物形成二聚体时，可重新设计引物或者使用巣式PCR
若模板或引物浓度过高，可适当降低模板或引物浓度
酶量过多，则适当减少酶量
Mg2+浓度偏高，则降低镁离子浓度
退火温度偏低，适当提高退火温度或使用二阶段温度法（94℃变性，65℃左右退火与延伸）
循环次数过多，不仅会降低扩增效率，且会使错误掺入率增加，因此需要减少循环次数。
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10楼2016-05-19 12:50:46
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