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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 基因在基因组DNA中克隆的问题
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瑷洱yd

金虫 (小有名气)

[求助] 基因在基因组DNA中克隆的问题 已有2人参与

已获得一个基因，在cDNA中设计引物扩增获得编码区全长，但是用同样的引物在gDNA中做PCR，结果为非单一条带，这是怎么回事啊？引物是起始密码子附近作为上游引物，终止密码子附近作为下游引物。求大神指点，如何在gDNA中扩增获得全长。@biostar2009@youlinglyw
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1楼 2016-05-17 11:30:32
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sloop112

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-05-17 21:48:21
瑷洱yd: 金币+5, ★有帮助, 灰常感谢你的建议 2016-05-19 10:44:06
本帖内容被屏蔽
2楼2016-05-17 16:44:55
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瑷洱yd

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sloop112 at 2016-05-17 16:44:55
很好理解，楼主设的引物在gDNA中有多个合适的结合位点，如果条带分的比较开，不影响后续的克隆，祝顺利

可是我希望能在gDna中也想克隆获得编码区全长，再与cDNA克隆序列进行比较分析其基因的内含子。大神那我应该怎么设计gDna扩增的引物了？

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3楼2016-05-17 16:55:33
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
设计更加特异的引物以改善非单一条带的状况
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Let God do with it as He wills
4楼2016-05-17 17:27:08
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瑷洱yd

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-05-17 17:27:08
设计更加特异的引物以改善非单一条带的状况

唉，想扩全长，引物设计好难

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5楼2016-05-17 19:22:18
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sloop112

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

瑷洱yd
6楼2016-05-18 09:02:36
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瑷洱yd

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sloop112 at 2016-05-18 09:02:36
建议找到该基因的上下游的基因，由于基因的保守性高于其可变区，就是所谓的跨基因扩增（即在上一个基因的尾部设计引物，在下一个基因的头部设计引物，增加延伸时间）...

谢谢你的建议，但所做的物种没有基因组测序，实施难度好大，我打算放弃了

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7楼2016-05-18 10:40:26
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瑷洱yd

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by sloop112 at 2016-05-18 09:02:36
建议找到该基因的上下游的基因，由于基因的保守性高于其可变区，就是所谓的跨基因扩增（即在上一个基因的尾部设计引物，在下一个基因的头部设计引物，增加延伸时间）...

因为你的不是应助回复所以不能给你金币了，送你红花，以表感谢

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8楼2016-05-18 10:42:42
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xiangbchen

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
瑷洱yd: 金币+3, ★有帮助 2016-05-19 10:43:15
建议用巢式PCR扩增，可获得特异扩增条带。

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9楼2016-05-18 11:07:06
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瑷洱yd

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by xiangbchen at 2016-05-18 11:07:06
建议用巢式PCR扩增，可获得特异扩增条带。

可以试试

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10楼2016-05-19 10:42:54
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