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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 构建重组质粒转化到大肠DH5a感受态中
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sh727986091

金虫 (小有名气)

[求助] 构建重组质粒转化到大肠DH5a感受态中 已有2人参与

DH5a转化后培养21h才长出1-2个菌落，是怎么回事，这会是阳性结果吗？菌落还很小，只是一个小点。
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1楼 2016-05-16 09:13:47
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sh727986091

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 守望海贝 at 2016-05-17 08:56:38
做连接转化这步用的东西全部换掉，重做一遍，正常情况12-16h就可以明显看到菌落...

好的，谢谢！

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8楼2016-05-17 18:21:54
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安静de执着14

新虫 (著名写手)
这个原因应该挺多吧，比如你的抗生素浓度太大，或者你的质粒没有构建成功，或者是假阳性等。是不是你要的结果，挑单菌落培养，然后提质粒酶切就好了。

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2楼2016-05-16 09:41:07
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030Selma

金虫 (正式写手)
可能你的感受态不行了

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3楼2016-05-16 10:12:10
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守望海贝

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sh727986091: 金币+3, ★★★很有帮助 2016-05-17 18:24:47
感受态细胞不行或者抗生素加多了，可以挑菌落培养后提取质粒进行PCR和酶切、测序鉴定，若正确的话，后续需要表达蛋白什么的，把提取的质粒重新转新的感受态细胞，挑单菌落培养菌液，保菌
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4楼2016-05-16 10:53:40
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