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sh727986091

金虫 (小有名气)

[求助] 构建重组质粒转化到大肠DH5a感受态中 已有2人参与

DH5a转化后培养21h才长出1-2个菌落,是怎么回事,这会是阳性结果吗?菌落还很小,只是一个小点。
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守望海贝

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引用回帖:
5楼: Originally posted by sh727986091 at 2016-05-16 21:25:36
之前用这批感受态细胞做过一次转化,空白对照没有菌落,转化的LB平板上长了50多个菌落,但是菌落PCR和试剂盒提取质粒跑出的电泳都没有条带,很是奇怪,可能存在的一个问题是挑取单菌落扩大培养的时候没有在LB液体培 ...

做连接转化这步用的东西全部换掉,重做一遍,正常情况12-16h就可以明显看到菌落
7楼2016-05-17 08:56:38
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安静de执着14

新虫 (著名写手)

这个原因应该挺多吧,比如你的抗生素浓度太大,或者你的质粒没有构建成功,或者是假阳性等。是不是你要的结果,挑单菌落培养,然后提质粒酶切就好了。

发自小木虫Android客户端
2楼2016-05-16 09:41:07
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030Selma

金虫 (正式写手)

3楼2016-05-16 10:12:10
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守望海贝

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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sh727986091: 金币+3, ★★★很有帮助 2016-05-17 18:24:47
感受态细胞不行或者抗生素加多了,可以挑菌落培养后提取质粒进行PCR和酶切、测序鉴定,若正确的话,后续需要表达蛋白什么的,把提取的质粒重新转新的感受态细胞,挑单菌落培养菌液,保菌
4楼2016-05-16 10:53:40
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