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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 冻融法转化农杆菌
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13654038437

新虫 (初入文坛)

[交流] 冻融法转化农杆菌 已有3人参与

各位大师，我转化的农杆菌卫星菌落太多，而且阳性菌落很难找到，怎么办

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1楼 2016-05-16 06:40:24
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orangeleaf

铜虫 (正式写手)
★
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筛选压力不够（抗生素浓度）？
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工业酶-T180;AU-400FLD;B85vanguard;E3-1280v3;NH-D9L;8GBx2;R7-250A-ZLH4;Black500GB;EA191M;SK-8115;M111s
2楼2016-05-16 11:30:16
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13654038437

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by orangeleaf at 2016-05-16 11:30:16
筛选压力不够（抗生素浓度）？

我加大了一点，还是没有，是不是转化失败

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3楼2016-05-19 07:11:02
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宇文数学

新虫 (正式写手)
★
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什么农杆菌，什么质粒，双抗的话一般卫星菌落很少

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4楼2016-05-19 07:43:47
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你太善良

新虫 (著名写手)
★
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温度高了，质粒丢失，长的都是假阳性。

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5楼2016-05-19 08:00:16
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13654038437

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 宇文数学 at 2016-05-19 07:43:47
什么农杆菌，什么质粒，双抗的话一般卫星菌落很少

pPZP100HG骨架载体。agl-1感受态农杆菌。抗生素是浓度是氨苄5：5，氯霉素是7.4：5。后来抗生素提高了一些

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6楼2016-05-20 07:13:10
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13654038437

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 你太善良 at 2016-05-19 08:00:16
温度高了，质粒丢失，长的都是假阳性。

我感觉温度这没什么问题，都是在冰上做，实验比较严谨

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7楼2016-05-20 07:13:45
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宇文数学

新虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
6楼: Originally posted by 13654038437 at 2016-05-20 07:13:10
pPZP100HG骨架载体。agl-1感受态农杆菌。抗生素是浓度是氨苄5：5，氯霉素是7.4：5。后来抗生素提高了一些
...

这抗生素浓度确实太低了

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8楼2016-05-20 07:32:11
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宇文数学

新虫 (正式写手)
★
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AGL-1我记得是利福平和羧苄青霉素抗性的吧，载体是潮霉素抗性的，为什么用氨苄和氯霉素双抗呢？

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9楼2016-05-20 07:38:09
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