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13654038437

新虫 (初入文坛)

[交流] 冻融法转化农杆菌 已有3人参与

各位大师,我转化的农杆菌卫星菌落太多,而且阳性菌落很难找到,怎么办

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orangeleaf

铜虫 (正式写手)


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筛选压力不够(抗生素浓度)?
工业酶-T180;AU-400FLD;B85vanguard;E3-1280v3;NH-D9L;8GBx2;R7-250A-ZLH4;Black500GB;EA191M;SK-8115;M111s
2楼2016-05-16 11:30:16
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13654038437

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by orangeleaf at 2016-05-16 11:30:16
筛选压力不够(抗生素浓度)?

我加大了一点,还是没有,是不是转化失败

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3楼2016-05-19 07:11:02
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宇文数学

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
什么农杆菌,什么质粒,双抗的话一般卫星菌落很少

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4楼2016-05-19 07:43:47
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你太善良

新虫 (著名写手)


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温度高了,质粒丢失,长的都是假阳性。

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5楼2016-05-19 08:00:16
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13654038437

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 宇文数学 at 2016-05-19 07:43:47
什么农杆菌,什么质粒,双抗的话一般卫星菌落很少

pPZP100HG骨架载体。agl-1感受态农杆菌。抗生素是浓度是氨苄5:5,氯霉素是7.4:5。后来抗生素提高了一些

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6楼2016-05-20 07:13:10
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13654038437

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 你太善良 at 2016-05-19 08:00:16
温度高了,质粒丢失,长的都是假阳性。

我感觉温度这没什么问题,都是在冰上做,实验比较严谨

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7楼2016-05-20 07:13:45
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宇文数学

新虫 (正式写手)


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引用回帖:
6楼: Originally posted by 13654038437 at 2016-05-20 07:13:10
pPZP100HG骨架载体。agl-1感受态农杆菌。抗生素是浓度是氨苄5:5,氯霉素是7.4:5。后来抗生素提高了一些
...

这抗生素浓度确实太低了

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8楼2016-05-20 07:32:11
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宇文数学

新虫 (正式写手)


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AGL-1我记得是利福平和羧苄青霉素抗性的吧,载体是潮霉素抗性的,为什么用氨苄和氯霉素双抗呢?

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9楼2016-05-20 07:38:09
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