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G号糖木虫 (正式写手)
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荧光定量PCR 已有3人参与
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最近要做某细菌的一个基因相对表达量，采用荧光定量pcr，现在有点搞不清楚的是先提取总RNA，然后买试剂盒的时候买的一步法RT-PCR试剂盒，我看它的说明书是先进行CDNA合成，然后进行pcr扩增。这样做的话产物是什么呢？反应中要我加的引物是我针对该基因序列设计出来的引物吗？那后续做荧光定量pcr时所加的模板就是前面做出来的pcr产物吗？引物还是加这个基因的特异性引物？ 才接触这块，请多多指教，谢谢 |
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 分子与遗传 |
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2楼2016-05-12 15:05:25
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6楼2016-05-12 18:02:31
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9楼2016-05-13 13:52:23
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cDNA合成就是反转录的过程，你会发现试剂盒中会给你提供oligo dt和随机六聚体引物，oligo dt为一段特殊的多聚t引物，可以特异的结合到mRNA的poly a上，所以用oligo dt反转录出来的产物为mRNA对应的cDNA，随机引物则会将总RNA反转录出来。推荐你多看看分子克隆这本书。此外RT-PCR为反转录PCR而荧光定量PCR为RT-qPCR,rt-qpcr和反转录的过程是独立的两个实验，首先将RNA反转录为cDNA然后在以合成的cDNA为模版做qPCR 发自小木虫Android客户端 |
14楼2016-05-14 20:10:10
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