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ggyy0911铁虫 (正式写手)
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关于酶的纯化倍数 已有1人参与
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最近整理数据，有一部分数据我无法理解不知道是不是测错了，恳请大神指导。 我做的酶纯化前及纯化后，用的Ni柱，纯化前粗酶20mL，过柱后5个咪唑浓度各收集了2mL，其中3个浓度梯度洗脱组分都有我的目的蛋白条带，100mmol/L这个浓度几乎没有杂带，于是我选了这个浓度洗脱的酶做了酶活。 按我的理解，既然20ml变成了100浓度梯度的2ml，那么已经浓缩了10倍吧。但是我测纯化前粗酶比活588，纯化后粗酶比活760，纯化倍数才1.3倍。跟10倍也相差太远了，是我哪步数据测定出了问题吗？？！！ @hc-material 发自小木虫Android客户端 |
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 蛋白表达纯化鉴定精华 |
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2楼2016-05-09 00:43:16
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7楼2016-05-09 10:41:35
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嗯嗯，谢谢~~ 我刚刚还意识到，我用的可是Millipore超滤啊，这个本身就有很强的浓缩作用了，不过我最后怕损失太多，我加量洗了好几次，2mL的纯化蛋白液本来应该是50ul，我足足洗出了400ul，即便这样也又浓缩了5倍。 我的目的酶在粗酶里，看SDS-PAGE的结果占比并不是很高，不过过超滤管的时候几乎只有单一条带了，不图浓缩，就图用这个除盐的。因为我蛋白含量很高…… 有没有可能是我酶失活了一部分，导致后来测定的总酶活降低，所以纯化后的比活力也降低了呢？（但是这样就得是酶虽然失活，可是酶本身作为蛋白还在的情况……） 重新表达得从头来，-80冻存的酶活不如新鲜的，我现在就纠结我这数据到底能用吗…… |
8楼2016-05-09 13:03:54
xuweitao
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9楼2016-05-10 08:23:44
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10楼2016-05-10 13:23:25