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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 关于酶的纯化倍数
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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by ggyy0911 at 2016-05-10 13:23:25
我觉得您太牛了~
  那我能不能顺便厚脸皮的再追问一下，我这个酶，活性中心有个Zn2+，有文献报道的，也是说Zn强催化，二价铁和三价铁是抑制活性的，但我后期做离子影响的时候发现，5mM的时候和文献报道相符，10mM ...

相对活性？高金属离子浓度下蛋白会变性的（30mM很高了）。在你提到的浓度范围(5-30mM)内，绝对活性随锌离子浓度增加还是降低啊？
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11楼2016-05-10 15:21:58
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by xuweitao at 2016-05-10 15:21:58
相对活性？高金属离子浓度下蛋白会变性的（30mM很高了）。在你提到的浓度范围(5-30mM)内，绝对活性随锌离子浓度增加还是降低啊？...

就是没加金属离子的酶活为100%，算的加了离子的对它的相对活性。
  绝对活性随着Zn离子浓度增加，倒是呈曲线，从30mM处开始下降了，这是意味着蛋白开始变性了吗？
  如果这样倒是可以解释好多现象，因为Al3+和二价铁三价铁一样，50mM的时候就增强的很厉害了，1.85倍的活性，30mM就开始增强。感觉30mM是个转折。
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12楼2016-05-10 22:53:26
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
建议：
1）先统一酶活单位。纯化前后酶活单位统一起来。
2）蛋白纯度高了，单位蛋白溶液的酶活力也就高，但酶活力高并不代表和催化能力（比酶活力）成正比。
3）纯化后的酶，取一定量，比如50ul，然后按比例用反应缓冲液稀释到之前的体积，在测下酶活，然后在换算，在比较结果。
可能测酶活的项目比较少，很多酶若浓度或活性很高，测的时候都需要稀释，然后测，然后换算。因为任何反应体系都有一个最适的体系量，并非多了就好。

纯化倍数的概念理解的不对，纯化倍数指的是纯化前后，目标蛋白占溶液总蛋白的比例之比，比如纯化前目标纯度45%，纯化后90%。纯化倍数就是0.9/0.45=2,祝好。
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13楼2016-05-12 09:12:38
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