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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by ggyy0911 at 2016-05-10 13:23:25
我觉得您太牛了~
  那我能不能顺便厚脸皮的再追问一下,我这个酶,活性中心有个Zn2+,有文献报道的,也是说Zn强催化,二价铁和三价铁是抑制活性的,但我后期做离子影响的时候发现,5mM的时候和文献报道相符,10mM ...

相对活性?高金属离子浓度下蛋白会变性的(30mM很高了)。在你提到的浓度范围(5-30mM)内,绝对活性随锌离子浓度增加还是降低啊?
11楼2016-05-10 15:21:58
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by xuweitao at 2016-05-10 15:21:58
相对活性?高金属离子浓度下蛋白会变性的(30mM很高了)。在你提到的浓度范围(5-30mM)内,绝对活性随锌离子浓度增加还是降低啊?...

就是没加金属离子的酶活为100%,算的加了离子的对它的相对活性。
  绝对活性随着Zn离子浓度增加,倒是呈曲线,从30mM处开始下降了,这是意味着蛋白开始变性了吗?
  如果这样倒是可以解释好多现象,因为Al3+和二价铁三价铁一样,50mM的时候就增强的很厉害了,1.85倍的活性,30mM就开始增强。感觉30mM是个转折。
12楼2016-05-10 22:53:26
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

建议:
1)先统一酶活单位。纯化前后酶活单位统一起来。
2)蛋白纯度高了,单位蛋白溶液的酶活力也就高,但酶活力高并不代表和催化能力(比酶活力)成正比。
3)纯化后的酶,取一定量,比如50ul,然后按比例用反应缓冲液稀释到之前的体积,在测下酶活,然后在换算,在比较结果。
可能测酶活的项目比较少,很多酶若浓度或活性很高,测的时候都需要稀释,然后测,然后换算。因为任何反应体系都有一个最适的体系量,并非多了就好。

纯化倍数的概念理解的不对,纯化倍数指的是纯化前后,目标蛋白占溶液总蛋白的比例之比,比如纯化前目标纯度45%,纯化后90%。纯化倍数就是0.9/0.45=2,祝好。
13楼2016-05-12 09:12:38
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