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ggyy0911

铁虫 (正式写手)

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[求助] 关于酶的纯化倍数已有1人参与

最近整理数据，有一部分数据我无法理解不知道是不是测错了，恳请大神指导。
我做的酶纯化前及纯化后，用的Ni柱，纯化前粗酶20mL，过柱后5个咪唑浓度各收集了2mL，其中3个浓度梯度洗脱组分都有我的目的蛋白条带，100mmol/L这个浓度几乎没有杂带，于是我选了这个浓度洗脱的酶做了酶活。
按我的理解，既然20ml变成了100浓度梯度的2ml，那么已经浓缩了10倍吧。但是我测纯化前粗酶比活588，纯化后粗酶比活760，纯化倍数才1.3倍。跟10倍也相差太远了，是我哪步数据测定出了问题吗？？！！

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1楼 2016-05-09 00:37:12

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hc-material

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建议：
1）先统一酶活单位。纯化前后酶活单位统一起来。
2）蛋白纯度高了，单位蛋白溶液的酶活力也就高，但酶活力高并不代表和催化能力（比酶活力）成正比。
3）纯化后的酶，取一定量，比如50ul，然后按比例用反应缓冲液稀释到之前的体积，在测下酶活，然后在换算，在比较结果。
可能测酶活的项目比较少，很多酶若浓度或活性很高，测的时候都需要稀释，然后测，然后换算。因为任何反应体系都有一个最适的体系量，并非多了就好。

纯化倍数的概念理解的不对，纯化倍数指的是纯化前后，目标蛋白占溶液总蛋白的比例之比，比如纯化前目标纯度45%，纯化后90%。纯化倍数就是0.9/0.45=2,祝好。