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ggyy0911

铁虫 (正式写手)

[求助] 关于酶的纯化倍数 已有1人参与

最近整理数据,有一部分数据我无法理解不知道是不是测错了,恳请大神指导。
  我做的酶纯化前及纯化后,用的Ni柱,纯化前粗酶20mL,过柱后5个咪唑浓度各收集了2mL,其中3个浓度梯度洗脱组分都有我的目的蛋白条带,100mmol/L这个浓度几乎没有杂带,于是我选了这个浓度洗脱的酶做了酶活。
  按我的理解,既然20ml变成了100浓度梯度的2ml,那么已经浓缩了10倍吧。但是我测纯化前粗酶比活588,纯化后粗酶比活760,纯化倍数才1.3倍。跟10倍也相差太远了,是我哪步数据测定出了问题吗??!!

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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)

不好意思,发现你之前的补充说明了。
粗酶用量一样的话,那就取决于你的酶在原有粗酶液中的比例了,比例很高(过表达)的情况下,提纯蛋白对比酶活的提高是有限的啦。(比方说你原来粗酶液中目标蛋白已经占了75%,你发现纯化系数才1.3倍就是完全正常的)
7楼2016-05-09 10:41:35
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)

忘了说了,做酶活前已经定量了,纯化前后用于反应体系的蛋白量是一样的,都是0.2mg。

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2楼2016-05-09 00:43:16
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)

各位大神周一开始工作了没呀~拜托给看看啦~

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3楼2016-05-09 08:13:37
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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
ggyy0911: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 金币双手送上,希望以后能多向您请教~ 2016-05-10 13:45:28
需要除掉咪唑。。。。。,有吗?
4楼2016-05-09 08:59:04
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