24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ggyy0911

铁虫 (正式写手)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 1093.6
散金: 16
红花: 8
帖子: 510
在线: 148.2小时
虫号: 1888956
注册: 2012-07-11
性别: MM
专业: 临床兽医学

[求助] 关于酶的纯化倍数已有1人参与

最近整理数据，有一部分数据我无法理解不知道是不是测错了，恳请大神指导。
我做的酶纯化前及纯化后，用的Ni柱，纯化前粗酶20mL，过柱后5个咪唑浓度各收集了2mL，其中3个浓度梯度洗脱组分都有我的目的蛋白条带，100mmol/L这个浓度几乎没有杂带，于是我选了这个浓度洗脱的酶做了酶活。
按我的理解，既然20ml变成了100浓度梯度的2ml，那么已经浓缩了10倍吧。但是我测纯化前粗酶比活588，纯化后粗酶比活760，纯化倍数才1.3倍。跟10倍也相差太远了，是我哪步数据测定出了问题吗？？！！

@hc-material 发自小木虫Android客户端

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白表达纯化鉴定精华

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

【求助/交流】关于酶蛋白的比活力及其纯化倍数之间的关系已经有9人回复

1楼 2016-05-09 00:37:12

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

ggyy0911

铁虫 (正式写手)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 1093.6
散金: 16
红花: 8
帖子: 510
在线: 148.2小时
虫号: 1888956
注册: 2012-07-11
性别: MM
专业: 临床兽医学

引用回帖:

7楼: Originally posted by xuweitao at 2016-05-09 10:41:35
不好意思，发现你之前的补充说明了。
粗酶用量一样的话，那就取决于你的酶在原有粗酶液中的比例了，比例很高（过表达）的情况下，提纯蛋白对比酶活的提高是有限的啦。（比方说你原来粗酶液中目标蛋白已经占了75%， ...

嗯嗯，谢谢~~
  我刚刚还意识到，我用的可是Millipore超滤啊，这个本身就有很强的浓缩作用了，不过我最后怕损失太多，我加量洗了好几次，2mL的纯化蛋白液本来应该是50ul，我足足洗出了400ul，即便这样也又浓缩了5倍。
  我的目的酶在粗酶里，看SDS-PAGE的结果占比并不是很高，不过过超滤管的时候几乎只有单一条带了，不图浓缩，就图用这个除盐的。因为我蛋白含量很高……
  有没有可能是我酶失活了一部分，导致后来测定的总酶活降低，所以纯化后的比活力也降低了呢？（但是这样就得是酶虽然失活，可是酶本身作为蛋白还在的情况……）
  重新表达得从头来，-80冻存的酶活不如新鲜的，我现在就纠结我这数据到底能用吗……