24小时热门版块排行榜    

查看: 840  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

龙城112

金虫 (小有名气)

112

[求助] PCR 已有1人参与

各位大神,我现在只知道基因的mRNA序列,想扩增其在基因组中的完整序列,但是我做的物种没有参考基因组,也无近缘物种做参考,我该怎么做才能扩增出来?万分感谢!
回复此楼
自生自灭
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rdfu510

铁虫 (初入文坛)

在3`和5'UTR设计引物,用DNA作模板PCR扩增,可以得到包含所有内含子的pre-mRNA序列,但无法得到上、下游的基因结构序列。引物设计可使用免费的Primer-BLAST或Primer3网络软件,就用预设的60C Tm, 20碱基长度。

发自小木虫Android客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2016-05-08 02:11:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
龙城112: 金币+25, ★★★很有帮助, 很有帮助 2016-05-08 20:13:38
如果你说的mRNA序列包括5‘UTR、3'UTR,那直接根据这两个区设计引物,用DNA做模板扩增。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2016-05-07 23:11:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

龙城112

金虫 (小有名气)

112

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-05-07 23:11:30
如果你说的mRNA序列包括5‘UTR、3'UTR,那直接根据这两个区设计引物,用DNA做模板扩增。

谢谢,您能讲清楚一些吗,为什么在3`和5'UTR设计引物,原理是什么?再次感谢

发自小木虫Android客户端
自生自灭
3楼2016-05-08 00:27:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

龙城112

金虫 (小有名气)

112

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-05-07 23:11:30
如果你说的mRNA序列包括5‘UTR、3'UTR,那直接根据这两个区设计引物,用DNA做模板扩增。

引物设计多长,Tm多少合适呢?

发自小木虫Android客户端
自生自灭
4楼2016-05-08 00:29:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生(3个名额)地质化工冶金领域 +63 AI8RaGaPaSCR 2026-08-07 66/3300 2026-08-14 06:15 by fhFebuBRaofp
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +12 医学老男孩 2026-08-13 30/1500 2026-08-14 06:02 by zyjwdhcs
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +3 启萌科技 2026-08-12 11/550 2026-08-13 22:57 by 启萌科技
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +9 Tide man 2026-08-10 10/500 2026-08-13 20:33 by 温淼淼淼
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
信息提示
请填处理意见