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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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龙城112

金虫 (小有名气)

112

[求助] PCR 已有1人参与

各位大神,我现在只知道基因的mRNA序列,想扩增其在基因组中的完整序列,但是我做的物种没有参考基因组,也无近缘物种做参考,我该怎么做才能扩增出来?万分感谢!
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自生自灭
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
龙城112: 金币+25, ★★★很有帮助, 很有帮助 2016-05-08 20:13:38
如果你说的mRNA序列包括5‘UTR、3'UTR,那直接根据这两个区设计引物,用DNA做模板扩增。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2016-05-07 23:11:30
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龙城112

金虫 (小有名气)

112

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-05-07 23:11:30
如果你说的mRNA序列包括5‘UTR、3'UTR,那直接根据这两个区设计引物,用DNA做模板扩增。

谢谢,您能讲清楚一些吗,为什么在3`和5'UTR设计引物,原理是什么?再次感谢

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自生自灭
3楼2016-05-08 00:27:04
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龙城112

金虫 (小有名气)

112

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-05-07 23:11:30
如果你说的mRNA序列包括5‘UTR、3'UTR,那直接根据这两个区设计引物,用DNA做模板扩增。

引物设计多长,Tm多少合适呢?

发自小木虫Android客户端
自生自灭
4楼2016-05-08 00:29:52
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rdfu510

铁虫 (初入文坛)

在3`和5'UTR设计引物,用DNA作模板PCR扩增,可以得到包含所有内含子的pre-mRNA序列,但无法得到上、下游的基因结构序列。引物设计可使用免费的Primer-BLAST或Primer3网络软件,就用预设的60C Tm, 20碱基长度。

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2016-05-08 02:11:02
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龙城112

金虫 (小有名气)

112

送红花一朵
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自生自灭
6楼2016-05-08 10:23:01
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

5楼rdfu510已回答了你的问题。
7楼2016-05-08 10:46:06
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