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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 探针法的荧光定量，ct值很小，而且还没有扩增曲线，求大神指导指导。
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苍蝇小田七

铜虫 (初入文坛)

[求助] 探针法的荧光定量，ct值很小，而且还没有扩增曲线，求大神指导指导。 已有1人参与

最近在做探针法的荧光定量建立标准曲线，使用的DNA模板是自己构建的质粒，为阳性样品，在做这个之前已经做了两个了没有问题，现在这个去怎么也做不出扩增曲线了，一开始的时候都没有ct值，后来更改了反应条件后又ct值但是都比较小，而且依然没有扩增曲线。我自己也拿这个定量的引物做了普通的PCR（模板是相同的）电泳后也是没有条带。昨天我干脆拿提取的核酸做了模板做的PCR可是依然没有条带。真心求助啊。

探针法的荧光定量，ct值很小，而且还没有扩增曲线，求大神指导指导。
IMG_1522.JPG


探针法的荧光定量，ct值很小，而且还没有扩增曲线，求大神指导指导。-1
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探针法的荧光定量，ct值很小，而且还没有扩增曲线，求大神指导指导。-2
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1楼 2016-05-05 08:57:04
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苍蝇小田七

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by XLK2011 at 2016-05-05 19:57:12
你成功做出来过，说明这套体系（包括引物，探针，模板，程序）都没有问题。只这个做不出来，只能说明引物保存出了问题，或者配制反应液过程中忘记加某种成分也有可能。
...

忘记加试剂是不可能的，我也看了荧光信号，咨询了机器的维护工程师，他说就是没有扩增，应该是引物的问题，谢谢了
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10楼2016-05-10 09:56:33
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XLK2011

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这种图不叫有Ct值！这种情况根本没有扩增，更谈不上Ct值了。
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2楼2016-05-05 09:06:47
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苍蝇小田七

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by XLK2011 at 2016-05-05 09:06:47
这种图不叫有Ct值！这种情况根本没有扩增，更谈不上Ct值了。

最后一张图上不是显示出来ct值了吗，那您知道这种情况是怎么回事吗？
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3楼2016-05-05 09:19:31
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XLK2011

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这种情况根本没有扩增
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4楼2016-05-05 09:37:29
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苍蝇小田七

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by XLK2011 at 2016-05-05 09:37:29
这种情况根本没有扩增

那您能告诉我一下是什么原因吗？我现在自己分析的是定量的引物有问题
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5楼2016-05-05 16:12:59
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XLK2011

木虫 (正式写手)
你成功做出来过，说明这套体系（包括引物，探针，模板，程序）都没有问题。只这个做不出来，只能说明引物保存出了问题，或者配制反应液过程中忘记加某种成分也有可能。

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6楼2016-05-05 19:57:12
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黄启秀

新虫 (正式写手)
是不是cbna有问题

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7楼2016-05-07 09:11:16
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许彦

木虫 (正式写手)
ct值是指扩增曲线和阈值线的交点，你这个图有ct的原因是阈值线调节错了，扩增应该是S形曲线，

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8楼2016-05-07 09:49:17
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skull123

木虫 (正式写手)
这个明显不是正常的曲线，到网上搜索一下一大堆正常的扩增曲线就知道了，你这个不行，从头做一遍再看看

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9楼2016-05-08 13:06:10
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