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bz臭臭

新虫 (初入文坛)

[求助] 用酶法测定燕麦种子中的β-葡聚糖含量,显色液用的GOPOD 已有2人参与

用酶法测定燕麦种子中的β-葡聚糖含量,显色液用的GOPOD,酶标仪510nm测定吸光度,葡萄糖标曲的OD值为何比空白的要低呢?
葡萄糖浓度μg/ml        0                 100                                 200                           300             400               空杯子
510nm吸光值        0.041900001        0.041299999        0.042100001        0.041999999          0.0405            0.048300002

我做了三次,都是标曲的0值是最5个值里边最大的,我现在找不到问题,怀疑是试剂有问题,准备重新配试剂,再做一次,GOPOD的配置  :葡萄糖试剂缓冲(储备)液:称取34g 磷酸二氢钾、10.5g 氢氧化钠和7.5g 对羟基苯甲酸在室温下溶解在200ml 的水中。用2mol/L 的盐酸或2mol/L 的氢氧化钠调整溶液的pH 至7.4,然后加入1g 的叠氮钠。用水调整体积至250ml。在4℃下暗处贮存,至少稳定1 2 个月。
葡萄糖试剂缓冲工作液:量取50ml葡萄糖试剂缓冲(储备)液, 用水调整体积至1000ml,加入80mg 4- 氨基非那宗,10mg 过氧化酶和200mg 葡萄糖氧化酶,溶解并置于棕色瓶内,在4 ℃下暗处贮存,该溶液稳定3 个月。

这个葡萄糖氧化酶加200mg的酶活力单位应该是多少啊,查文献查不到,求助求助求助!
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海豚彦彦

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

首先,510nm下检测的是红色,那你的标准品反应后的颜色是什么颜色呢?
另外,你的方法参考的哪里的呢?是什么标准,AOAC 995.16吗?
GOPOD是跟葡萄糖显色的吧,所以葡聚糖需要先分解为葡萄后再参与反应。
3楼2016-05-31 14:31:30
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Anemone静爷

新虫 (小有名气)

亲,请问你是做燕麦研究的吗?我想求助一下,如果我做燕麦米的话,需要添加什么辅料?

发自小木虫IOS客户端
2楼2016-05-12 00:56:45
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海豚彦彦

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

明白了,你用的方法是改良后的酶法,利用氢氧化钠溶液处理并用酸中和后,用经纯化处理的纤维酶将样品中的β-葡聚糖酶解成葡萄糖。经调整体积和离心分离后,生成的葡萄糖用葡萄糖氧化酶-过氧化酶方法在可见分光光度计上510nm 处测定。
4楼2016-05-31 17:02:37
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bz臭臭

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 海豚彦彦 at 2016-05-31 17:02:37
明白了,你用的方法是改良后的酶法,利用氢氧化钠溶液处理并用酸中和后,用经纯化处理的纤维酶将样品中的β-葡聚糖酶解成葡萄糖。经调整体积和离心分离后,生成的葡萄糖用葡萄糖氧化酶-过氧化酶方法在可见分光光度计 ...

是的呢,我的反应之后就没有颜色变化,我也找不到原因,老师您说应该是什么问题呢?期间换过一次葡萄糖氧化酶
5楼2016-06-29 17:16:04
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