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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用酶法测定燕麦种子中的β-葡聚糖含量，显色液用的GOPOD
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bz臭臭

新虫 (初入文坛)

[求助] 用酶法测定燕麦种子中的β-葡聚糖含量，显色液用的GOPOD 已有2人参与

用酶法测定燕麦种子中的β-葡聚糖含量，显色液用的GOPOD，酶标仪510nm测定吸光度，葡萄糖标曲的OD值为何比空白的要低呢？
葡萄糖浓度μg/ml        0                 100                                 200                           300             400               空杯子
510nm吸光值        0.041900001        0.041299999        0.042100001        0.041999999          0.0405            0.048300002

我做了三次，都是标曲的0值是最5个值里边最大的，我现在找不到问题，怀疑是试剂有问题，准备重新配试剂，再做一次，GOPOD的配置  ：葡萄糖试剂缓冲(储备)液：称取34g 磷酸二氢钾、10.5g 氢氧化钠和7.5g 对羟基苯甲酸在室温下溶解在200ml 的水中。用2mol/L 的盐酸或2mol/L 的氢氧化钠调整溶液的pH 至7.4，然后加入1g 的叠氮钠。用水调整体积至250ml。在4℃下暗处贮存，至少稳定1 2 个月。
葡萄糖试剂缓冲工作液：量取50ml葡萄糖试剂缓冲(储备)液, 用水调整体积至1000ml，加入80mg 4- 氨基非那宗，10mg 过氧化酶和200mg 葡萄糖氧化酶，溶解并置于棕色瓶内，在4 ℃下暗处贮存，该溶液稳定3 个月。

这个葡萄糖氧化酶加200mg的酶活力单位应该是多少啊，查文献查不到，求助求助求助！
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1楼 2016-05-04 18:14:15
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海豚彦彦

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

明白了，你用的方法是改良后的酶法，利用氢氧化钠溶液处理并用酸中和后，用经纯化处理的纤维酶将样品中的β-葡聚糖酶解成葡萄糖。经调整体积和离心分离后，生成的葡萄糖用葡萄糖氧化酶-过氧化酶方法在可见分光光度计上510nm 处测定。
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4楼2016-05-31 17:02:37
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Anemone静爷

新虫 (小有名气)
亲，请问你是做燕麦研究的吗？我想求助一下，如果我做燕麦米的话，需要添加什么辅料？

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2楼2016-05-12 00:56:45
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海豚彦彦

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

首先，510nm下检测的是红色，那你的标准品反应后的颜色是什么颜色呢？
另外，你的方法参考的哪里的呢？是什么标准，AOAC 995.16吗？
GOPOD是跟葡萄糖显色的吧，所以葡聚糖需要先分解为葡萄后再参与反应。
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3楼2016-05-31 14:31:30
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bz臭臭

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 海豚彦彦 at 2016-05-31 17:02:37
明白了，你用的方法是改良后的酶法，利用氢氧化钠溶液处理并用酸中和后，用经纯化处理的纤维酶将样品中的β-葡聚糖酶解成葡萄糖。经调整体积和离心分离后，生成的葡萄糖用葡萄糖氧化酶-过氧化酶方法在可见分光光度计 ...

是的呢，我的反应之后就没有颜色变化，我也找不到原因，老师您说应该是什么问题呢？期间换过一次葡萄糖氧化酶
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5楼2016-06-29 17:16:04
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