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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Millipore超滤离心管浓缩纯化后的蛋白质
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落木778

铜虫 (小有名气)

[求助] Millipore超滤离心管浓缩纯化后的蛋白质 已有4人参与

请教各位大神，我的目的蛋白是携带GST标签的，分子量大约40KDa，使用Millipore超滤离心管浓缩，规格4ml , 10KDa；4℃，4000rpm,10min离心后约摸剩下200ul浓缩后的蛋白，然后进行BCA浓度测定，发现浓缩后的蛋白的浓度比将废弃的液体的蛋白浓度还要低，迷惑了，请求分析与帮助！！！
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1楼 2016-05-02 15:03:25
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pursuream

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 落木778 at 2016-05-03 10:42:55
请问用什么方法可以检测离心管的滤膜是否完整？...

你的4000rpm对应多少g？初始体积有多少？转速似乎有些高。我一般用到3000 rpm, 约2000 g。你可以试试超滤荧光蛋白，看下面有无荧光。

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9楼2016-05-06 01:04:06
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查看全部 12 个回答

aoda123

木虫 (正式写手)
是不是转速大，离心管的滤膜破了？

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身体健康，工作顺利
2楼2016-05-02 22:26:44
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moychan

银虫 (小有名气)
换一种方法吧，这种方法本身就有很大的损失

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3楼2016-05-02 22:47:01
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虫虫笑了

木虫 (小有名气)
是不是小于目的蛋白的杂蛋白量很大呢，一旦过滤之后，大部分的杂蛋白被分离出去，剩下的蛋白虽然体积小了，但是浓度也不会很高
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1111
4楼2016-05-03 09:15:32
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