应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Millipore超滤离心管浓缩纯化后的蛋白质
121/2返回列表12下一页
查看: 4582  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

落木778

铜虫 (小有名气)

[求助] Millipore超滤离心管浓缩纯化后的蛋白质 已有4人参与

请教各位大神，我的目的蛋白是携带GST标签的，分子量大约40KDa，使用Millipore超滤离心管浓缩，规格4ml , 10KDa；4℃，4000rpm,10min离心后约摸剩下200ul浓缩后的蛋白，然后进行BCA浓度测定，发现浓缩后的蛋白的浓度比将废弃的液体的蛋白浓度还要低，迷惑了，请求分析与帮助！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-05-02 15:03:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

moychan

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
6楼: Originally posted by 落木778 at 2016-05-03 10:42:06
请问你平时用哪种方法进行蛋白浓缩？...

透析袋浓缩，或冷冻干燥

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2016-05-03 20:48:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

应该是膜破了，缩短离心时间到1-2分钟，如果一样大部分都滤过去了，肯定是漏。 换个管吧，另外考虑是不是转速过高了，看你转子大小了，3000g以内的离心力应该没问题。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2016-05-06 09:39:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

aoda123

木虫 (正式写手)
是不是转速大，离心管的滤膜破了？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
身体健康，工作顺利
2楼2016-05-02 22:26:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

moychan

银虫 (小有名气)
换一种方法吧，这种方法本身就有很大的损失

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-05-02 22:47:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫虫笑了

木虫 (小有名气)
是不是小于目的蛋白的杂蛋白量很大呢，一旦过滤之后，大部分的杂蛋白被分离出去，剩下的蛋白虽然体积小了，但是浓度也不会很高
赞一下 回复此楼
1111
4楼2016-05-03 09:15:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

落木778

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 虫虫笑了 at 2016-05-03 09:15:32
是不是小于目的蛋白的杂蛋白量很大呢，一旦过滤之后，大部分的杂蛋白被分离出去，剩下的蛋白虽然体积小了，但是浓度也不会很高

浓缩之前，跑PAGE验证了，单一的目的蛋白条带。
赞一下 回复此楼
5楼2016-05-03 10:41:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

落木778

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by moychan at 2016-05-02 22:47:01
换一种方法吧，这种方法本身就有很大的损失

请问你平时用哪种方法进行蛋白浓缩？
赞一下 回复此楼
6楼2016-05-03 10:42:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

落木778

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by aoda123 at 2016-05-02 22:26:44
是不是转速大，离心管的滤膜破了？

请问用什么方法可以检测离心管的滤膜是否完整？
赞一下 回复此楼
7楼2016-05-03 10:42:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pursuream

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 落木778 at 2016-05-03 10:42:55
请问用什么方法可以检测离心管的滤膜是否完整？...

你的4000rpm对应多少g？初始体积有多少？转速似乎有些高。我一般用到3000 rpm, 约2000 g。你可以试试超滤荧光蛋白，看下面有无荧光。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2016-05-06 01:04:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 落木778 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +3 15779376950 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:27 by 15779376950
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 291分工科求调剂 +8 science饿饿 2026-03-01 9/450 2026-03-01 14:22 by Ducount.Y
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[考研] 0805总分292，求调剂 +3 幻想之殇 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:11 by yc258
[考研] 材料化工调剂 +8 今夏不夏 2026-03-01 9/450 2026-03-01 13:25 by yc258
[考研] 0856化工专硕求调剂 +6 董boxing 2026-03-01 6/300 2026-03-01 12:45 by houyaoxu
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +3 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 6/300 2026-03-01 11:50 by gaoxiaoniuma
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考研] 高分子化学与物理调剂 +5 好好好1233 2026-02-28 9/450 2026-03-01 10:59 by fengyu211
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 298求调剂 +5 axyz3 2026-02-28 5/250 2026-03-01 06:45 by 刘兵
[考研] 272求调剂 +4 田智友 2026-02-28 4/200 2026-03-01 06:43 by 刘兵
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭