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落木778

铜虫 (小有名气)

[求助] Millipore超滤离心管浓缩纯化后的蛋白质 已有4人参与

请教各位大神,我的目的蛋白是携带GST标签的,分子量大约40KDa,使用Millipore超滤离心管浓缩,规格4ml , 10KDa;4℃,4000rpm,10min离心后约摸剩下200ul浓缩后的蛋白,然后进行BCA浓度测定,发现浓缩后的蛋白的浓度比将废弃的液体的蛋白浓度还要低,迷惑了,请求分析与帮助!!!
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moychan

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
6楼: Originally posted by 落木778 at 2016-05-03 10:42:06
请问你平时用哪种方法进行蛋白浓缩?...

透析袋浓缩,或冷冻干燥

发自小木虫Android客户端
8楼2016-05-03 20:48:15
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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

应该是膜破了,缩短离心时间到1-2分钟,如果一样大部分都滤过去了,肯定是漏。 换个管吧,另外考虑是不是转速过高了,看你转子大小了,3000g以内的离心力应该没问题。
10楼2016-05-06 09:39:09
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普通回帖

aoda123

木虫 (正式写手)

是不是转速大,离心管的滤膜破了?

发自小木虫Android客户端
身体健康,工作顺利
2楼2016-05-02 22:26:44
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moychan

银虫 (小有名气)

换一种方法吧,这种方法本身就有很大的损失

发自小木虫Android客户端
3楼2016-05-02 22:47:01
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虫虫笑了

木虫 (小有名气)

是不是小于目的蛋白的杂蛋白量很大呢,一旦过滤之后,大部分的杂蛋白被分离出去,剩下的蛋白虽然体积小了,但是浓度也不会很高
1111
4楼2016-05-03 09:15:32
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落木778

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 虫虫笑了 at 2016-05-03 09:15:32
是不是小于目的蛋白的杂蛋白量很大呢,一旦过滤之后,大部分的杂蛋白被分离出去,剩下的蛋白虽然体积小了,但是浓度也不会很高

浓缩之前,跑PAGE验证了,单一的目的蛋白条带。
5楼2016-05-03 10:41:23
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落木778

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by moychan at 2016-05-02 22:47:01
换一种方法吧,这种方法本身就有很大的损失

请问你平时用哪种方法进行蛋白浓缩?
6楼2016-05-03 10:42:06
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落木778

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by aoda123 at 2016-05-02 22:26:44
是不是转速大,离心管的滤膜破了?

请问用什么方法可以检测离心管的滤膜是否完整?
7楼2016-05-03 10:42:55
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pursuream

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 落木778 at 2016-05-03 10:42:55
请问用什么方法可以检测离心管的滤膜是否完整?...

你的4000rpm对应多少g?初始体积有多少?转速似乎有些高。我一般用到3000 rpm, 约2000 g。你可以试试超滤荧光蛋白,看下面有无荧光。

发自小木虫Android客户端
9楼2016-05-06 01:04:06
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