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原核表达 已有2人参与
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最近做原核表达遇到了不少问题，希望各位大神指教！！！ 1. 我18° 18小时和37°2个小时都做过诱导表达 最后在上清和包涵体里都看不到表达，想知道还应该怎么改条件吗？ 2.我取表达的菌液离心后发现沉淀都偏红，这是不是影响表达的一个因素？这是什么造成的？ 3.我加了gst诱导原核蛋白做对照，发现做了两次gst也没有原核表达。请问问题出在哪？我得操作回忆了一下都不是问题。 发自小木虫IOS客户端 |
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jinchanzi
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2楼2016-04-26 16:13:19
3楼2016-04-29 21:21:32
【答案】应助回帖
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你可以用1mMIPTG37℃先诱导4小时。然后裂解上清，沉淀跑胶，有抗体的话直接WB看是否有表达，没有抗体，直接过柱子纯化一次看看。都没有，那你就得考虑密码子优化了，或者换成Rosste菌。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-04-29 21:26:58
soarrow
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5楼2016-04-30 01:03:01