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i760912798

木虫 (正式写手)

[交流] 转化时DNA加入感受态细胞的体积 已有8人参与

转化时DNA加入感受态细胞的体积一般多大,可以按照所用DNA体积不超过感受态细胞的体积的1/10吗?

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yangzeng1991

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
一般是2uL加入100uL

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2楼2016-04-25 19:38:05
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菜头Q

铜虫 (初入文坛)

★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-04-29 07:50:51
一般我自己做的连接产物,会转化5ul到50ul感受态细胞中;如果是提的质粒或者买来的质粒的话,就转1ul到50ul感受态细胞中。
3楼2016-04-25 20:42:00
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i760912798

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 菜头Q at 2016-04-25 20:42:00
一般我自己做的连接产物,会转化5ul到50ul感受态细胞中;如果是提的质粒或者买来的质粒的话,就转1ul到50ul感受态细胞中。

转化的DNA的浓度多少呢

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4楼2016-04-25 20:56:26
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菜头Q

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by i760912798 at 2016-04-25 20:56:26
转化的DNA的浓度多少呢
...

没有特别计算过。
5楼2016-04-26 13:59:25
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xiaohhh

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
一般提的质粒模板一般浓度比较高很好转,加个1ul,0.5ul,最后涂平板还要取个三分之一,就会长很多。连接或突变的可以多加点,一般全加。当然和你的感受态实验室环境都有关系。你可以先按这个做做,再调整一下量。
6楼2016-04-26 16:49:59
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任我逍遥江南

铜虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
连接产物转克隆菌,一般是10微升转100,质粒转表达菌的话,2微升转50

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7楼2016-04-26 20:50:05
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
一般是要按质量算,

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I am not a hero , but I served with heroes!
8楼2016-04-26 22:02:17
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i760912798

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by wlt728 at 2016-04-26 22:02:17
一般是要按质量算,

仅考虑质粒的质量,还需要考虑质粒的浓度吗?我要转化1ug质粒DNA到40ul感受态细胞中,质粒DNA的浓度一般多大合适,体积不超过多大合适?

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9楼2016-04-27 08:46:38
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玉兔Jane

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
质粒转化大肠杆菌感受态,0.5-1-2ul 转化到20 30 50ul都是差不多的吧,涂板的时候会少涂一些;也可以少加点质粒;
连接产物转化大肠杆菌感受态,3-5ul 30-50ul感受态,其实也还好,没有很严格,稍微多或少1-2ul都是可以的啊。
10楼2016-04-27 23:07:35
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