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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 转化时DNA加入感受态细胞的体积
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i760912798

木虫 (正式写手)

[交流] 转化时DNA加入感受态细胞的体积 已有8人参与

转化时DNA加入感受态细胞的体积一般多大，可以按照所用DNA体积不超过感受态细胞的体积的1/10吗？

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1楼 2016-04-25 18:51:27
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yangzeng1991

木虫 (小有名气)
★
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一般是2uL加入100uL

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2楼2016-04-25 19:38:05
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菜头Q

铜虫 (初入文坛)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-04-29 07:50:51
一般我自己做的连接产物，会转化5ul到50ul感受态细胞中；如果是提的质粒或者买来的质粒的话，就转1ul到50ul感受态细胞中。
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3楼2016-04-25 20:42:00
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i760912798

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 菜头Q at 2016-04-25 20:42:00
一般我自己做的连接产物，会转化5ul到50ul感受态细胞中；如果是提的质粒或者买来的质粒的话，就转1ul到50ul感受态细胞中。

转化的DNA的浓度多少呢

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4楼2016-04-25 20:56:26
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菜头Q

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by i760912798 at 2016-04-25 20:56:26
转化的DNA的浓度多少呢
...

没有特别计算过。
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5楼2016-04-26 13:59:25
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xiaohhh

银虫 (小有名气)
★
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一般提的质粒模板一般浓度比较高很好转，加个1ul,0.5ul，最后涂平板还要取个三分之一，就会长很多。连接或突变的可以多加点，一般全加。当然和你的感受态实验室环境都有关系。你可以先按这个做做，再调整一下量。
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6楼2016-04-26 16:49:59
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任我逍遥江南

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
连接产物转克隆菌，一般是10微升转100，质粒转表达菌的话，2微升转50

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7楼2016-04-26 20:50:05
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
★
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一般是要按质量算，

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I am not a hero , but I served with heroes！
8楼2016-04-26 22:02:17
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i760912798

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wlt728 at 2016-04-26 22:02:17
一般是要按质量算，

仅考虑质粒的质量，还需要考虑质粒的浓度吗？我要转化1ug质粒DNA到40ul感受态细胞中，质粒DNA的浓度一般多大合适，体积不超过多大合适？

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9楼2016-04-27 08:46:38
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玉兔Jane

新虫 (小有名气)
★
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质粒转化大肠杆菌感受态，0.5-1-2ul 转化到20 30 50ul都是差不多的吧，涂板的时候会少涂一些；也可以少加点质粒；
连接产物转化大肠杆菌感受态，3-5ul 30-50ul感受态，其实也还好，没有很严格，稍微多或少1-2ul都是可以的啊。
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10楼2016-04-27 23:07:35
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