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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助，已知一段800bp左右的核苷酸序列，如何设计引物
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十五进制

木虫 (正式写手)

[求助] 求助，已知一段800bp左右的核苷酸序列，如何设计引物 已有5人参与

RT，我知道核苷酸序列，共800bp左右，如何设计引物扩增呢，是用重叠延伸方法么，那要如何设计？
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1楼 2016-04-22 17:15:37
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
800bp引物的设计还是比较简单的，利用相关软件设计（primer 3.0）.
另外你是只有800想完全扩增这些序列，还是什么？
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4楼2016-04-22 19:38:18
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普通回帖

科学小覃

木虫 (正式写手)
什么用途？
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生物科学
2楼2016-04-22 17:21:38
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
800bp又不大，直接设计引物扩就行。
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3楼2016-04-22 18:16:17
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十五进制

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-22 19:38:18
800bp引物的设计还是比较简单的，利用相关软件设计（primer 3.0）.
另外你是只有800想完全扩增这些序列，还是什么？

完全扩增，没有模板

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5楼2016-04-22 20:36:42
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十五进制

木虫 (正式写手)
不懂如何设计，求教

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6楼2016-04-22 20:42:55
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Miscanthus

铁虫 (初入文坛)
扩增完干嘛用？只要800根据两端序列直接设计就对了，模板是载体很好办，模板是基因组要考虑同源序列。good luck

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困了累了，做点试验玩玩
7楼2016-04-22 21:44:08
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Miscanthus

铁虫 (初入文坛)
要连载体就考虑酶的末端，扩增时直接加上酶的序列

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困了累了，做点试验玩玩
8楼2016-04-22 21:46:31
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biozhajie

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
那心须要在这段序列以外的上下游分别设计引物 再考虑须扣除的测序时起始阶段的杂峰区片段 估计扩增片段至少要1000多

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9楼2016-04-22 21:51:57
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王箬竹

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用引物设计软件或者NCBI等在线设计均可，RT的引物不需要考虑跨内含子什么的，需要注意的是设完后最好在数据库比对一下，所设上下游引物有没有同源基因，尤其注意3端，避免非特异扩增，祝好运！

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10楼2016-04-22 22:16:36
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