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十五进制

木虫 (正式写手)

[求助] 求助,已知一段800bp左右的核苷酸序列,如何设计引物 已有5人参与

RT,我知道核苷酸序列,共800bp左右,如何设计引物扩增呢,是用重叠延伸方法么,那要如何设计?
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
800bp引物的设计还是比较简单的,利用相关软件设计(primer 3.0).
另外你是只有800想完全扩增这些序列,还是什么?
4楼2016-04-22 19:38:18
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普通回帖

科学小覃

木虫 (正式写手)

什么用途?
生物科学
2楼2016-04-22 17:21:38
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
800bp又不大,直接设计引物扩就行。
3楼2016-04-22 18:16:17
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十五进制

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-22 19:38:18
800bp引物的设计还是比较简单的,利用相关软件设计(primer 3.0).
另外你是只有800想完全扩增这些序列,还是什么?

完全扩增,没有模板

发自小木虫Android客户端
5楼2016-04-22 20:36:42
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十五进制

木虫 (正式写手)

6楼2016-04-22 20:42:55
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Miscanthus

铁虫 (初入文坛)

扩增完干嘛用?只要800根据两端序列直接设计就对了,模板是载体很好办,模板是基因组要考虑同源序列。good luck

发自小木虫IOS客户端
困了累了,做点试验玩玩
7楼2016-04-22 21:44:08
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Miscanthus

铁虫 (初入文坛)

要连载体就考虑酶的末端,扩增时直接加上酶的序列

发自小木虫IOS客户端
困了累了,做点试验玩玩
8楼2016-04-22 21:46:31
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biozhajie

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
那心须要在这段序列以外的上下游分别设计引物 再考虑须扣除的测序时起始阶段的杂峰区片段 估计扩增片段至少要1000多

发自小木虫Android客户端
9楼2016-04-22 21:51:57
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王箬竹

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用引物设计软件或者NCBI等在线设计均可,RT的引物不需要考虑跨内含子什么的,需要注意的是设完后最好在数据库比对一下,所设上下游引物有没有同源基因,尤其注意3端,避免非特异扩增,祝好运!

发自小木虫Android客户端
10楼2016-04-22 22:16:36
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