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关于细菌基因敲除的疑问
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1.构建缺失菌株时，被缺失的目的基因是否要满足是3的倍数？ 2.在构建多基因缺失载体时，将2个基因连在一起时，使用酶切连接效率高还是通过重叠PCR连接效率高？ 3.革兰氏阳性菌一般用什么敲除载体？能够推荐几个载体（哪家公司的） 4.上下游同源臂设计长度一般多少同源效率高？ 5.缺失基因时只能缺失编码基因吗？看文献有些人在设计时上下同源臂达到了1000-2000bp，而缺失掉的基因长度也就300-400多bp（目的基因cds编码区800多bp），这种情况我想同源臂包含了启动子区了，是不是不管同源臂是多长，只要有目的基因cds区的缺失，被缺失的基因必须还得满足3的倍数？ 6.目前crispr-cas9比较热，这个技术能否用于非模式细菌（除了大肠杆菌之外的，如革兰氏阳性菌） |
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