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关于细菌基因敲除的疑问
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1.构建缺失菌株时,被缺失的目的基因是否要满足是3的倍数? 2.在构建多基因缺失载体时,将2个基因连在一起时,使用酶切连接效率高还是通过重叠PCR连接效率高? 3.革兰氏阳性菌一般用什么敲除载体?能够推荐几个载体(哪家公司的) 4.上下游同源臂设计长度一般多少同源效率高? 5.缺失基因时只能缺失编码基因吗?看文献有些人在设计时上下同源臂达到了1000-2000bp,而缺失掉的基因长度也就300-400多bp(目的基因cds编码区800多bp),这种情况我想同源臂包含了启动子区了,是不是不管同源臂是多长,只要有目的基因cds区的缺失,被缺失的基因必须还得满足3的倍数? 6.目前crispr-cas9比较热,这个技术能否用于非模式细菌(除了大肠杆菌之外的,如革兰氏阳性菌) |
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