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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 关于细菌基因敲除的疑问
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bddk

金虫 (小有名气)

[求助] 关于细菌基因敲除的疑问

1.构建缺失菌株时，被缺失的目的基因是否要满足是3的倍数？
2.在构建多基因缺失载体时，将2个基因连在一起时，使用酶切连接效率高还是通过重叠PCR连接效率高？
3.革兰氏阳性菌一般用什么敲除载体？能够推荐几个载体（哪家公司的）
4.上下游同源臂设计长度一般多少同源效率高？
5.缺失基因时只能缺失编码基因吗？看文献有些人在设计时上下同源臂达到了1000-2000bp，而缺失掉的基因长度也就300-400多bp（目的基因cds编码区800多bp），这种情况我想同源臂包含了启动子区了，是不是不管同源臂是多长，只要有目的基因cds区的缺失，被缺失的基因必须还得满足3的倍数？
6.目前crispr-cas9比较热，这个技术能否用于非模式细菌（除了大肠杆菌之外的，如革兰氏阳性菌）
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1楼 2016-04-10 20:21:11
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
最好是用CRISPR技术

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2楼2016-04-12 20:49:37
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bddk

金虫 (小有名气)
能说的具体一些吗，如crisp cas9在细菌中如何进行敲除？
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3楼2016-04-12 23:41:28
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18716248350

新虫 (小有名气)
顶一下，我也想知道答案

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4楼2016-04-13 00:12:48
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王冠傑

铁虫 (小有名气)
我也想知道答案

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5楼2016-04-13 12:26:27
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tetexu

新虫 (小有名气)
顶一下，最近也在试着解决这些问题

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6楼2017-03-24 10:03:16
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碎碎小叶

新虫 (小有名气)
想也学习一下新技术

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7楼2017-10-15 23:27:07
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MJ2020

新虫 (小有名气)
1是必须的吧，小于3个后边就错位了呀

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8楼2020-07-16 11:34:44
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MJ2020

新虫 (小有名气)
多基因敲，比如两个基因连续不？不连续就得分开敲

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9楼2020-07-16 11:36:14
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MJ2020

新虫 (小有名气)
为什么给我推这么老的帖子。。。

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10楼2020-07-16 11:39:09
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