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雨落樱木123铜虫 (初入文坛)
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[求助]
连目的基因的表达载体电转到GS115，YPDS平板上只长了一两个或不长。
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| 本人新手做毕赤酵母表达。使用的表达载体是 pPICZαA ，在测序结果正确后，根据Easy Select™ Pichia Expression Kit For Expression of Recombinant Proteins Using p PICZ and p PICZα in Pichia pastoris 这个文献，做电转化到毕赤酵母GS115的实验， 具体是将线性化后的连接液与酵母感受态电转化后迅速加1mL山梨醇然后37℃热浴1小时，然后避光分量涂布在YPDS的平板上，30℃培养箱中培养，但是两天后发现平板上有的没长，有的只长了两个，再继续培养几天还是没长且已长的菌落不是很大。接着挑了几个长的菌诱导表达，发现没有酶活。这个过程虽然影响因素很多但是我做了三次（有一次是电转后没有热浴直接离心，涂板时去掉了一部分的山梨醇。）都是这样的结果，所以我想知道在这个过程中具体哪些步骤出现了问题，除了质粒提取（已验证没问题）。求各位大神不吝指导。谢谢！！ |
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5楼2017-05-19 16:28:26
6楼2017-07-30 11:04:14
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电转加入山梨醇以后，30℃静置培养1小时，然后就直接涂板吗？还是低速离心去除部分上清再涂板？ 另外，加入山梨醇以后就直接涂板吗？还是在山梨醇之后再加YPD培养基培养一小时之后涂板？ 发自小木虫Android客户端 |
7楼2017-07-30 11:07:34
方余meteor
木虫 (小有名气)
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8楼2017-07-31 20:20:50