应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连目的基因的表达载体电转到GS115，YPDS平板上只长了一两个或不长。
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 1910  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

雨落樱木123

铜虫 (初入文坛)

[求助] 连目的基因的表达载体电转到GS115，YPDS平板上只长了一两个或不长。

本人新手做毕赤酵母表达。使用的表达载体是 pPICZαA ，在测序结果正确后，根据Easy Select™ Pichia Expression Kit For Expression of Recombinant Proteins Using p PICZ and p PICZα in Pichia pastoris 这个文献，做电转化到毕赤酵母GS115的实验， 具体是将线性化后的连接液与酵母感受态电转化后迅速加1mL山梨醇然后37℃热浴1小时，然后避光分量涂布在YPDS的平板上，30℃培养箱中培养，但是两天后发现平板上有的没长，有的只长了两个，再继续培养几天还是没长且已长的菌落不是很大。接着挑了几个长的菌诱导表达，发现没有酶活。这个过程虽然影响因素很多但是我做了三次（有一次是电转后没有热浴直接离心，涂板时去掉了一部分的山梨醇。）都是这样的结果，所以我想知道在这个过程中具体哪些步骤出现了问题，除了质粒提取（已验证没问题）。求各位大神不吝指导。谢谢！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-04-10 13:38:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (职业作家)
热浴应该是30度，2小时

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-04-12 20:50:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wdl19931214

新虫 (初入文坛)
可以借您点pPICZαA空载体吗？购买也可以。万分感谢！
赞一下 回复此楼
3楼2016-05-13 09:12:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Joker_wang

金虫 (初入文坛)
应该是30度静置两小时 绝对不是37度

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2016-06-03 02:39:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一哟嚯

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Joker_wang at 2016-06-03 02:39:20
应该是30度静置两小时 绝对不是37度

对的，酵母最适温度为30℃，我们是直接30℃培养箱活化一小时。
赞一下 回复此楼
5楼2017-05-19 16:28:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张张张zhang

新虫 (初入文坛)
请问lz现在怎么样了？我也是同样的质粒和菌，电转做了两次都不出结果，有问题想咨询一下，不知道方不方便？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2017-07-30 11:04:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张张张zhang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 张张张zhang at 2017-07-30 11:04:14
请问lz现在怎么样了？我也是同样的质粒和菌，电转做了两次都不出结果，有问题想咨询一下，不知道方不方便？

电转加入山梨醇以后，30℃静置培养1小时，然后就直接涂板吗？还是低速离心去除部分上清再涂板？
另外，加入山梨醇以后就直接涂板吗？还是在山梨醇之后再加YPD培养基培养一小时之后涂板？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2017-07-30 11:07:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

方余meteor

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 张张张zhang at 2017-07-30 11:07:34
电转加入山梨醇以后，30℃静置培养1小时，然后就直接涂板吗？还是低速离心去除部分上清再涂板？
另外，加入山梨醇以后就直接涂板吗？还是在山梨醇之后再加YPD培养基培养一小时之后涂板？
...

加上复苏培养基低转速摇1小时，然后低速离心留100微升涂布，这些有成熟的protocol啊

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2017-07-31 20:20:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 雨落樱木123 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 看看我！301求调剂 081700 +3 一个小明同学 2026-03-24 3/150 2026-03-31 09:40 by longlotian
[考研] 308求调剂 +8 墨墨漠 2026-03-25 8/400 2026-03-31 09:15 by dgd2013
[考研] 22408 359分调剂 +4 Qshers 2026-03-27 8/400 2026-03-31 08:53 by Qshers
[考研] 105500药学求调剂，一志愿山东大学药学，348分 +3 gr哈哈哈 2026-03-28 3/150 2026-03-30 18:56 by 源_2020
[考研] 071010 323 分求调剂 +3 Baekzhy 2026-03-27 3/150 2026-03-30 14:24 by andresqi
[考研] 化学308分调剂 +7 你好明天你好 2026-03-30 8/400 2026-03-30 13:02 by 你好明天你好
[考研] 317求调剂 +10 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 10/500 2026-03-30 09:45 by longlotian
[考研] 考研调剂 +7 小蜡新笔 2026-03-29 7/350 2026-03-29 19:00 by 学员8dgXkO
[考研] 330分求调剂 +5 qzenlc 2026-03-29 5/250 2026-03-29 07:37 by 无际的草原
[考研] 压国家一区线，求导师收留，有恩必谢！ +7 迷人的哈哈 2026-03-28 7/350 2026-03-28 16:47 by 催化大白
[考研] 085602 307分 求调剂 +7 不知道叫什么！ 2026-03-26 7/350 2026-03-28 09:57 by 神马都不懂
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
[考研] 安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分，英语已过四六级，六级521，求调剂 +4 美味可乐鸡翅 2026-03-26 4/200 2026-03-27 15:27 by 星空星月
[考研] 085600，材料与化工321分调剂 +4 大馋小子 2026-03-27 6/300 2026-03-27 14:11 by 松花缸1201
[考研] 0703化学338求调剂！ +6 Zuhui0306 2026-03-26 7/350 2026-03-27 10:35 by shangxh
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 调剂 +4 柚柚yoyo 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:43 by fmesaito
[考研] 求b区院校调剂 +4 周56 2026-03-24 5/250 2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 各位老师您好：本人初试372分 +5 jj涌77 2026-03-25 6/300 2026-03-25 14:15 by mapenggao
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭